厭氧培養箱應安放在溫差較小、操作方便的位置，應避免陽光直曬和遠離采暖設備，放置平穩；將混合氣瓶、氮氣瓶安放平穩，并分別裝好減壓閥（含壓力表），安置在適當位置；接上氣路并檢查氣路，為防止漏氣，必要時可在各接管處用密封膠粘合；
操作過程：
1. 按使用要求放置好必要的附件和器具，并向操作室內放入二個無毒塑料袋；
2. 通電源開照明燈，開溫控儀，調節所需溫度及安全溫度；
3. 操作室內放入1000g鈀粒（封閉）和500g干燥劑，并放入美蘭指示劑（封閉）；
4. 關緊取樣室內外門，并抽真空校驗；
5. 操作室內*次置換（氮氣置換）：
A. 先用橡皮管插入操作室內進氣口，另一頭插入塑料袋；
B. 接通氮氣進氣路，打開氮氣控制閥1，使二只塑料袋充足氮氣，關閉閥門1，然后扎緊袋口；
C. 把乳膠手套套在觀察板法蘭圈上并扎緊；
D. 把塑料袋內氮氣漸漸放于操作室內，至全部放出。
6. 操作室第二次置換（氮氣置換）重復一次充氮過程，取樣室先抽真空，并注意隨時用腳踏開關開閉排氣。
7. 操作室第三次置換（混合氣體置換）：（混合氣體配比為N2 85%、H2 10%、CO2 5%）
A. 調換氣路打開混合氣閥3進氣，充氣時取樣室先抽真空，并隨時用腳踏開關開閉排氣；
B. 混合氣充滿塑料袋后，關掉混合氣閥，并打開閥5，使混合氣經過流量計，調整流量計，流量為每分鐘10ml左右；
C. 把塑料袋內混合氣漸漸排于操作室內；
D. 通過三次換氣后，操作室內氣體含氧量已處于極微量狀態。
8. 操作室內打開粑粒除氧劑，接通除氧催化器電源進行催化除氧，一小時后開美蘭指示劑（美蘭安瓶）觀察其變色情況，不變色為操作室內達到厭氧環境；
9. 開紫外線滅菌燈，室內進行滅菌處理，滅菌時間按具體實驗自定。
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