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液相色譜柱的選擇、使用、維護和常見故障及排除

閱讀:2089      發(fā)布時間:2016-3-22
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  摘要:液相色譜的柱子通常分為正相柱和反相柱。正相柱大多以硅膠為柱,或是在硅膠表面鍵合-CN,-NH3等官能團的鍵合相硅膠柱;反相柱填料主要以硅膠為基質(zhì),在其表面鍵合非極性的十八烷基官能團(ODS)稱為C18柱,其它常用的反相柱還有C8,C4,C2和苯基柱等。另外還有離子交換柱,GPC柱,聚合物填料柱等。

一、反相色譜柱的選擇

1.柱子的pH值使用范圍反相柱優(yōu)點是固定相穩(wěn)定,應(yīng)用廣泛,可使用多種溶劑。但硅膠為基質(zhì)的填料,使用時一定要注意流動相的PH范圍。一般的C18柱pH值范圍都在2-8,流動相的pH值小于2時,會導(dǎo)致鍵合相的水解;當(dāng)pH值大于7時硅膠易溶解;經(jīng)常使用緩沖液固定相要降解。一旦發(fā)生上述情況,色譜柱人口處會塌陷。同樣填料各種不同牌號的色譜柱不盡相同。如果流動相PH較高或經(jīng)常使用緩沖液時,建議選擇pH范圍大的柱子,例如戴安公司的Acclaim柱pH2-9或Zorbax的pH2-11.5的柱子。

2.填料的端基封尾(或稱封口)把填料的殘余硅羥基采用封口技術(shù)進行端基封尾,可改善對極性化合物的吸附或拖尾;含碳量增高了,有利于不易保留化合物的分離;填料穩(wěn)定性好了,組分的保留時間重現(xiàn)性就好。如果待分析的樣品屬酸性或堿性的化合物,選用填料經(jīng)端基封尾的色譜柱。

3.戴安公司Acclaim柱子介紹—極性封尾C16固定相柱戴安公司有28種類型的柱子,Acclaim反相柱填料高純,金屬含量極低,*封尾。pH2-9范圍內(nèi)兼容,低流失,高柱效。尤其是2003年推出的Acclaim極性封尾C16柱,是先商品化的磺酰氨-O鏈接鍵的色譜柱,具極低的硅羥基活性,能在極性溶劑甚至100%水的條件下使用。對酸性和堿性化合物有極為尖銳的好的色譜峰形,與現(xiàn)有的*色譜柱相比有更好的立體選擇性。

二、液相色譜柱的使用色譜柱在使用前,進行柱的性能測試,并將結(jié)果保存起來,作為今后評價柱性能變化的參考。在做柱性能測試時要按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是佳條件),只有這樣,測得的結(jié)果才有可比性。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同。

1、樣品的前處理

a、使用流動相溶解樣品。

b、使用預(yù)處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。

c、使用0.45—0.8

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