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噬菌體試驗的基本方法
閱讀：920 發(fā)布時間：2024-8-12（一）噬菌體的分離和純化
1 . 噬菌體的分離
每份未處理的污水樣品取100mL，混合后，經36±1℃培養(yǎng)14~24h，通過孔徑為0.45mm的薄膜濾器，檢查濾液中是否有噬菌體的存在。用斑點試驗法檢查噬菌體。
2 . 單斑純化
根據(jù)斑點試驗法的結果，估計濾液內噬菌體的數(shù)量。將濾液按百倍稀釋法作兩次連續(xù)稀釋。即吸取0.02mL，稀釋在2mL肉湯內，使成10-2；再吸取此稀釋液0.02mL，稀釋在2mL肉湯內，使成10-4。
（二）PFU和RTD
PFU和RTD是噬菌體效價的計量單位。PFU是噬斑形成單位，表示有感染能力的噬菌體數(shù)量，以每毫升內的PFU表示（PFU/ml）。RTD是常規(guī)試驗稀釋度，一般以平板上滴加噬菌體的部位剛剛能夠出現(xiàn)或剛剛不能出現(xiàn)完-全融合性裂解（CL）所需要的噬菌體稀釋度。
（三）噬菌體的制備
繁殖菌：制備噬菌體用的宿主菌稱為繁殖菌，噬菌體的繁殖菌應予以凍干保存。
噬菌體種： 制備用的噬菌體種應經三次純化后保存，種子管先作PFU測定。
（四）裂解譜和裂解模式
裂解譜是指一種噬菌體的作用范圍。裂解譜的測定是為了確定該噬菌體在種內或屬內的廣譜性，在種外或屬外的交叉反應性。
裂解模式是指幾種噬菌體組成為配套，各種細菌培養(yǎng)物被幾種噬菌體作用而出現(xiàn)的特殊的反應模式，不同的細菌，可呈現(xiàn)不同的反應模式。
裂解譜和裂解模式應使用達到規(guī)定效價的噬菌體進行測定。腸桿菌科診斷用噬菌體一般用原液進行試驗，效價要求在103~105RTD或109~1011PFU/ml之間。分型試驗一般用1 RTD的噬菌體。
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