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戊二醛二步法實驗原理及步驟
閱讀：4818 發布時間：2013-7-18戊二醛二步法實驗原理及步驟
產品名稱：戊二醛 規格：BR，25-28% 包裝：100ML/500ML/4LT/20L CAS： 111-30-8 分子式：C5H8O2 分子量：F.W. 100.12 保存條件： RT 作用：科研
戊二醛二步法
1. 原理
戊二醛為一種雙功能試劑，通過其醛基分別與酶和免疫球蛋白上的氨基共價結合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白結合物。
2. 標記步驟
（1）稱取HRP25mg溶于1.25%戊二醛溶液中，于室溫靜置夜。
（2）反應后的酶溶液經Sephadex G-25層析柱，用生理鹽水洗脫。流速控制在1ml/1分鐘，收集棕色流出液。如體積大于5ml，則以PEG濃縮至5ml。放置25ml小燒杯中，緩慢攪拌。
（3）將待標記的抗體12.5mg用生理鹽水稀釋至5ml，攪拌下逐滴加入酶溶液中。
（4）用1M PH9.5碳酸緩沖液0.25ml，繼續攪拌3小時。
（5）加0.2M賴氨酸0.25ml，混勻后，置室溫2小時。
（6）在攪拌下逐滴加入等體積飽和硫酸銨，置4℃ 1小時。
（7）3000rpm離心半小時，棄上清。沉淀物用半飽和硫酸銨洗二次，zui后沉淀物溶于少量0.15M PH7.4的PBS中。
（8）將上述溶液裝入透析袋中，對0.15M PH7.4的PBS緩沖鹽水透析，去除銨離子后（用萘氏試劑檢測），10,000rpm離心30分鐘去除沉淀，上清液即為酶結合物，分裝后，冰凍保存。
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