化工儀器網
公司動態
ELISA實驗結果影響——酶結合物
閱讀：1763 發布時間：2017-10-23大家都知道影響ELISA實驗結果的因素有很多，今天上海恒遠為大家分享影響ELISA實驗結果的其中一種因素——酶結合物！
在ELISA實驗中，用酶標記的抗體或抗原統稱為結合物，此為進行ELISA檢測的關鍵試劑。常規使用ELISA法的主要問題是能夠簡便地制備酶結合物，而此種制備好的酶結合物要求穩定，具有很高的酶活性，抗原或抗體的特異性，產量高及成本低。
用什么樣的酶來標記抗原或抗體呢？可根據以下幾點來選擇適當的酶。
1、酶制品的純度及活力高，催化效力也高，放大倍數大（即一個酶分子能催化幾十幾百個底物分子發生反應的酶）。
2、酶及制備好的酶結合物在檢測或貯存中能保持穩定。
3、酶制劑易得、價廉.
4、既要適用于標記抗原，又適用于標記抗體，標記后不影響抗原或抗體的免疫學特性，也不降低酶的活性。
5、酶的反應產物穩定，檢測時簡便、快速。在定量測定中產物必須是可溶性的。
6、要有安全、價廉、易得的底物。
符合上述條件的酶有：堿性磷酸酶，一般用分子量為5×105（Alkaline Phospatase,簡稱AP），辣根過氧化物酶（Horse Radish Peroxidase,簡稱HRP,分子量為4×104）,另外尚有葡萄糖氧化酶，β-半乳糖甙酶，糖化酶及乙酰膽堿酯酶等等。其中以前兩種（AP和HRP）zui為常用。
AP活力高，制備好的酶結合物可加NaN3防腐，但此種酶不易獲得，因其是從小牛腸粘膜中或大腸桿菌中提取，而且價格比較昂貴。因此，目前國內外大多使用HRP。HRP活性也高，價格較便宜。但制得酶結合物不能加NaN3防腐。因NaN3能抑制HRP的活性，但可作低溫保存或加60%緩沖甘油等量混合后少量分裝，保存冰箱，一般可用1-2年。
由于HRPzui為常用，故先把HRP的一般性質介紹一下，以便在制備酶結合物時可引起注意。
(HRP的性質):HRP系從辣根菜的根中所提取，這種酶是無色酶蛋白與暗棕色的鐵卟啉（E鐵血素）相結合的一種醣蛋白，可簡寫成由多個（6-7個）同功 酶所組成。分子量約為40000，等電點為PH7.2。能被58-62%飽和硫酸銨沉淀，在PH3.5-12均較穩定。63℃15分鐘，室溫數周、甲苯和其他苯類有機溶劑處理都不影響它的活性。
