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Elisa標準曲線做不好的原因分析
閱讀：6619 發布時間：2017-7-7 上周青島農業大學徐老師在我公司購買了相應的抗體自己包被Elisa試劑盒。由于徐老師是位實驗新手，剛剛接觸Elisa實驗，研究大鼠干擾素相關指標的實驗，做完大鼠γ干擾素Elisa實驗后反應標準曲線的梯度都不好。剛加完顯色劑的時候梯度還算明顯，但是顯色比較淺，隨著時間延長(大概6、7分鐘)以后梯度就不明顯了。終止反應后測得的值梯度就沒有了。
為此，我公司技術員對Elisa標準曲線做不好的原因做出分析：
1.剛加完顯色劑時梯度明顯：顯色液可能是從高濃度向低濃度孔加的。
2.酶濃度太高，導致zui后顯色結果都是高的。
3.包被-酶標系統不匹配或者酶標的非特異反應太強，或者酶標儀讀數范圍不夠。
4.樣本中有能夠催化底物的物質，沒洗下來。
5.建議：包被、酶標重新做梯度，先用較低的濃度把梯度摸索好，然后再優化靈敏度，zui后調出所需的靈敏度、線性范圍
6.有條件的話，可以把酶免的蛋白系統移植到板式化學發光上，加完底物三分鐘讀數。
7.蛋白系統靈敏度夠的話，顯色十分鐘就差不多了。
8.酶是自己標的這種情況的，HRP比例不要太高。
問題解決后，徐老師對我公司試劑盒的售后服務非常滿意，并表示下學期會有新的實驗課題，直接買我公司的進口品牌Elisa試劑盒。非常感謝青島農業大學徐老師對上海恒遠生物科技有限公司的支持與信賴。