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ITC等溫滴定量熱儀正確使用步驟

閱讀:173      發布時間:2025-5-26
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  ITC等溫滴定量熱儀是一種用于測量生物分子相互作用(如酶-底物、抗體-抗原、核酸-配體等)的熱力學參數的精密儀器。
  以下是ITC等溫滴定量熱儀實驗操作步驟:
  1. 加載樣品
  滴定池(Sample Cell):
  加入受體溶液(如蛋白質或核酸溶液)。
  注射器(Syringe):
  吸入配體溶液(如底物或抑制劑),確保無氣泡,安裝到注射器模塊。
  2. 開始滴定
  基線穩定:
  啟動儀器,等待基線穩定。
  初始滴定:
  執行一次大體積滴定,觀察信號響應,檢查是否漏液或堵塞。
  正式滴定:
  按設定參數逐滴滴定,記錄每次滴定后的熱量變化。
  觀察信號峰值和回歸基線情況,避免過載或飽和。
  3. 數據采集
  實時監控:
  觀察軟件中的原始滴定曲線,確保信號正常(如峰形對稱、無異常噪聲)。
  保存數據:
  實驗結束后保存原始數據文件,備份至本地或云端。
  二、ITC等溫滴定量熱儀實驗后處理:
  1. 清洗儀器
  沖洗注射器和滴定池:
  用超純水或緩沖液多次沖洗,去除殘留樣品。
  拆卸注射器,用專用工具清洗活塞和密封圈,避免堵塞。
  干燥與維護:
  擦干儀器表面,定期檢查攪拌子、溫度傳感器和電路連接。
  2. 數據分析
  擬合模型:
  使用分析軟件對原始數據進行擬合。
  選擇合適模型(如單一站點結合模型、多站點模型或異構結合模型)。
  參數提取:
  結合常數(Ka):反映配體與受體的結合親和力。
  焓變(ΔH):結合過程的熱量變化(正值為放熱,負值為吸熱)。
  熵變(ΔS)和吉布斯自由能(ΔG):通過范特霍夫方程計算。
  化學計量數(n):配體與受體的結合比例。
  3. 結果驗證
  重復實驗:
  重復至少3次獨立實驗,確保數據一致性。
  對照實驗:
  設置空白對照(如緩沖液滴定緩沖液),排除非特異性信號。
 

 

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