聯(lián)系電話
上海寶葉生物科技有限公司
中級會員·6年
- 聯(lián)系人：
- 蔣先生
- 電話：
- 手機(jī)：
- 13391038817
- 地址：
- 上海市嘉定區(qū)新源路155弄
- 個性化：
- www.shjsbio.com
- 網(wǎng)址：
- www.shjsbio.com
掃一掃訪問手機(jī)商鋪
方法步驟：
1） 吸取20 μL 的蛋白質(zhì)樣本，小心注入微量滴定盤中，避免氣泡產(chǎn)生。
2） 每一樣品槽加入200 μL 基質(zhì)液，混合均勻；可用燒熱的接種環(huán)去除氣泡。
3） 靜置約1~2 min，顏色開始加深，然后加入30 μL 終止液。 反應(yīng)時間的長短，要以樣本中的酶活性大小來做調(diào)整。因?yàn)槲覀冎粶y定色析法各分劃的相對酶活性，因此并不加終止液。
4） 以ELISA 光度計測定波長415 nm 的吸光值。
酶活性單位的測定：
a. 以上步驟，只可測定GUS 活性的相對大小，對色析法所得到的各個分劃進(jìn)行偵測，相當(dāng)方便，但并非酶活性單位的測定方法。
b. 若要測定酶的活性單位，要使用zui適當(dāng)?shù)拿赣昧浚姑冈诜磻?yīng)一段固定的時間后，其生成物的呈色吸光度，落在光度計的可測范圍的內(nèi)；然后計算此段時間內(nèi)，每分鐘所產(chǎn)生的吸光度增加量，轉(zhuǎn)換成生成物的莫耳數(shù)，即可求得其真正的活性單位。
c. 因此酶的活性單位定義為：每分鐘所能催化生成物的 μmole 數(shù)。
