關(guān)鍵詞:全基因合成|實驗技術(shù)服務(wù)
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全基因合成|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
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測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>DNA是十分龐大的生物分子。病毒含有幾千到幾十萬個核苷酸，原核生物的DNA分子平均為10E6個堿基對，真核生物的DNA分子可達l0E9個堿基對。按每個基因平均為1000個堿基對進行粗略的計算，大腸桿菌約有3000-4000個基因，而人類細胞的基因數(shù)目可高達200萬個。雖然其中某些基因，特別是真核細胞內(nèi)的一些基因是多拷貝的，在基因組內(nèi)有多個甚多個重復(fù)，實際基因數(shù)要比上述推算的基因數(shù)要少得多。盡管如此，原核細胞和真核細胞基因組內(nèi)的基因數(shù)目仍然是極為驚人的。
人工合成
由于研究某些基因或者某種蛋白的生理作用，例如生理活性等，因此，需要通過人工實驗的方法合成一段全基因序列。
有效方法
經(jīng)過基因工程學(xué)工作者艱苦細致的探索研究，人們現(xiàn)在已經(jīng)掌握了分離和制造目的基因的一些有效方法。一般來說，目前獲取目的基因的方法主要有三種:反向轉(zhuǎn)錄法、從細胞基因組直接分離法和人工化學(xué)合成法，這些方法都有一個前提，就是已有文獻報道所研究的目的基因的蛋白序列或者基因的序列。
1、反向轉(zhuǎn)錄法
這種方法主要用于分子量較大而又不知其序列的基因，它以目的基因的mRNA為模板，設(shè)計上下游引物，借助反轉(zhuǎn)錄酶合成堿基互補的DNA片段，即cDNA，再在DNA聚合酶的作用下合成雙鏈cDNA，亦即目的基因的雙鏈DNA。
2、基因組擴增法
利用基因組抽提試劑盒，可以從細胞、植物、血液、動物組織中直接分離基因組，設(shè)計特異擴增的引物，利用抽提的基因組為模版，直接PCR擴增，以獲取目的基因。
3、人工合成
依照某一蛋白質(zhì)的氨基酸序列，或基因序列，設(shè)計全長引物，利用OVERLAP方法形成模版DNA，再利用PCR擴增的方法得到雙鏈DNA，然后將PCR產(chǎn)物轉(zhuǎn)化克隆至克隆載體或者表達載體中。化學(xué)合成全基因目前是準(zhǔn)確率zui高，速度zui快的方法，同時可以依據(jù)密碼子在不同宿主細胞的偏愛性和不同的實驗需求，設(shè)計基因序列，提高表達水平。