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PCR檢測試劑盒原理與注意事項
閱讀：1057 發布時間：2020-12-16PCR檢測試劑盒原理：
本試劑盒系由預包被PCR檢測試劑盒的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成，應用酶聯免疫法（ELISA）原理檢測豬血清、血漿樣本中豬瘟病毒抗體。實驗時在酶標板中加入對照血清和待檢樣本，經溫育后若樣品中含有豬瘟病毒抗體，則將與酶標板上抗原結合，經洗滌除去未結合的其他成分后；再加入酶標記物，與酶標板上抗原抗體復合物發生特異性結合；再經洗滌除去未結合的酶標記物，在孔中加TMB底物液，與酶反應形成藍色產物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關；加入終止液終止反應后，產物變為黃色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有豬瘟病毒抗體。
PCR檢測試劑盒注意事項：
1、樣品的濃度等指標是根據標準曲線計算出來的，所以首先要把做標準曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事，否則后面的實驗結果無從談起。
2、設置標準曲線樣品的標準濃度范圍要有一個比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度，即樣品的濃度要在標準曲線濃度范圍之內，包括上限和下限。而對于呈S型的標準曲線，盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度陡段，即曲線幾乎成直線的范圍內。
3、采用倍比稀釋法配制標準曲線中的標準樣品濃度，這樣就能夠保證標準樣品的濃度不會出現較大的偏離。
4、檢測標準樣品時，應按濃度遞增順序進行，以減少高濃度對低濃度的影響，提高準確性。
5、標準曲線的樣品數一般為7個點，但至少要保證有5個點。
6、做出的PCR檢測試劑盒標準曲線相關系數因實驗要求不同而有所變動，但一般來說，相關系數R至少要大于0.98，對于有些實驗，至少要0.99甚至是0.999.
PCR檢測試劑盒性能：
1. 準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值，大于等于0.9900。
2. 靈敏度：檢測濃度小于0.1 U/mL。
3. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4. 重復性：板內、板間變異系數均小于15%。
5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
6. 有效期：6個月