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競爭抑制ELISA方法的檢測建立
閱讀：170 發(fā)布時間：2015-6-9一、 抗體的酶標(biāo)記及質(zhì)量鑒定
ELISA試劑盒本試驗采用改良過碘酸鈉法將辣根過氧化物酶標(biāo)記在抗體上[1]，標(biāo)記完后取上清用Sephedex G200 凝膠層析進(jìn)行純化，洗脫液為0.2mol/L pH7.4的PBS，流速為15ml/h，分步收集，每支3ml，以紫外分光光度計測A280吸光度值，以洗脫體積為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)做圖，收集*峰即為酶標(biāo)抗體峰。標(biāo)記完后用紫外分光光度計在分別在280nm、及403nm處測定酶標(biāo)記物的A值，計算免疫球蛋白量、摩爾比值、酶結(jié)合率以及標(biāo)記率。
二、包被用緩沖液及zui適包被抗原濃度的優(yōu)化
1、包被緩沖液的優(yōu)化
ELISA試劑盒包被抗原時，為了得到*的包被效果，我們采用了碳酸鹽緩沖液（50mM ph9.6 ）、磷酸鹽緩沖液（50mM ph7.6）、以及TRIS鹽酸緩沖液（50 mM ph7.6）三種緩沖液作為包被液，抗原包被濃度為5ug/ml，及2.5ug/ml,酶標(biāo)抗體工作濃度為1：400及1：300，用自動酶標(biāo)儀分析，選擇*的包被緩沖液系統(tǒng)。同時為了保證緩沖液能夠長期保存，我們在包被液中添加了0.01%的硫柳汞作為防腐劑。
2、zui適抗原包被濃度的優(yōu)化
ELISA試劑盒用優(yōu)化好的包被緩沖液，將包被抗原（ALB）稀釋成0.1ug/ml，1.0ug/ml，2.0ug/ml，4.0 ug/ml，6.0 ug/ml，8.0 ug/ml，10.0 ug/ml等六個濃度，包被微孔板，每孔100ul；競爭抗原濃度為4.0 ug/ml，2.0 ug/ml；酶標(biāo)抗體稀釋度為1：300，經(jīng)孵育、顯色、終止后用自動酶標(biāo)儀分析。顯色的強(qiáng)度在一定范圍內(nèi)與包被的抗原量成正比，但隨著包被抗原濃度的增加，顯色的強(qiáng)度反而降低，我們選擇臨界包被值作為包被抗原量。
ANKRD20A3 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白20A3抗體
ANKRD22 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白22抗體
ANKRD50 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白50抗體
ATP6V1G2 氫離子轉(zhuǎn)運ATP合成酶6G抗體
ANKRD26 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白26抗體
ANKRD26 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白26抗體
ACY3 丙型肝炎病毒核結(jié)合蛋白-1抗體
ARSK 芳香基硫酸酯酶K抗體
Amphiphysin 神經(jīng)元突觸前膜蛋白抗體
Ankyrin G 錨定蛋白G抗體
Actin 肌動蛋白α/α-SMA/α Actin抗體
ADAMTS1 整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型抗體
ADAMTS7(NT) 整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型-7抗體 (N端抗體)
ADAMTS7 整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型-7抗體
beta Adducin 內(nèi)收蛋白抗體
ADFP 脂肪組織分化相關(guān)蛋白抗體
Adiponectin Receptor 1 脂聯(lián)素受體1抗體
ADM R 腎上腺髓質(zhì)素受體抗體
Adiponectin 脂聯(lián)素抗體
ADM 腎上腺髓質(zhì)素抗體
Adenosine A3 Receptor 腺苷受體A3抗體
ADRA2 ADRA2腎上腺素能受體2抗體