化工儀器網
技術文章
細胞感染方法
閱讀：152 發布時間：2016-7-1（一）細胞準備
將狀態良好的目的細胞接種到24孔板，使細胞濃度為1×105/ml細胞，接種細胞數量因細胞的生長速度而略有不同，一般是保證第二天進行病毒感染的時候細胞匯合率介于50%至70%之間。ELISA試劑盒
（二）病毒感染
1.感染細胞*佳MOI的測定MOI（MultiplicityofInfection，感染復數）是指每個細胞感染的病毒數，通常MOI越高，病毒整合到染色體的數量以及目的蛋白的表達量越高。對于分裂活躍的細胞，比如Hela、293細胞，MOI=1～3時，80%以上的細胞均表達目的基因。而對于非分裂細胞，比如原代細胞，感染效率較低。需要進行MOI梯度摸索實驗，選擇適合的MOI進行實驗。
2.感染步驟
按實驗需要將細胞鋪板（比如12孔板）；細胞數以第2天密度約50%為宜；37℃培養。
對于Polybrene可施加的細胞：準備*培養基和Polybrene混合物，Polybrene終濃度為摸索得到的zui適終濃度。移去培養基并添加0.5mlPolybrene/培養基混合物于每孔中（適用于24孔板，其他孔板請相應調整體）。
對于不適用Polybrene的細胞，以上步驟省略，直接進入下面步驟：
感染前，從冰箱取出并在37℃水浴中快速融化病毒，吸去細胞原有培養基，將病毒原液加入細胞中，輕輕8字混勻。感染后第二天（約12小時），吸去含病毒的培養液，換上新鮮的*培養液，繼續37℃培養。感染后48小時，對于帶GFP報告基因的病毒，可通過熒光顯微鏡觀測GFP表達效率，對于攜帶Puromycin抗性基因的病毒，換上含適當濃度的Puromycin的新鮮*培養液，篩選穩定轉導的細胞株。
LAS2 肺腺瘤易感蛋白2抗體
phospho-LEO1(Ser551) 磷酸化RNA聚合酶相關蛋白LEO1抗體
LATS2 腫瘤抑制基因LATS2抗體
phospho-LSP1 (Ser204) 磷酸化白細胞F肌動蛋白結合蛋白抗體
phospho-LATS2 (Ser83) 磷酸化腫瘤抑制基因LATS2抗體
phospho-LSP1 (Ser252) 磷酸化白細胞F肌動蛋白結合蛋白抗體
LSP1 白細胞F肌動蛋白結合蛋白抗體
LZTFL1 亮氨酸拉鏈轉錄因子樣1抗體
Laminin B2 gamma 1 層粘連蛋白B2γ1抗體
Phospho-LAT (Tyr161) 磷酸化T細胞活化連接蛋白抗體
Phospho-LAT (Tyr200) 磷酸化T細胞活化連接蛋白抗體
LRP1/CD91 低密度脂蛋白受體相關蛋白1抗體
LPCAT2 磷脂酰基轉移酶2抗體