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ELISA試劑瞬時轉染剖析法
閱讀：158 發布時間：2016-7-191.瞬時轉染剖析法ELISA試劑盒
現在有許多功用性剖析辦法用于研討轉錄調控,zui常用的辦法是瞬時轉染剖析法.該辦法是經過必定的轉染程序將含意圖調控區的質粒導人培育細胞.在典型情況下,調控區調控“報告基因”的轉錄.報告基因是在mRNA和蛋白質的水平上都易于被準確檢查到的基因 .發生的質粒在培育細胞中轉錄后,在特定時刻測定從報告基因上合成的mRNA或蛋白質,以評估調控區的活性.大家將這種剖析辦法稱為瞬時轉染剖析,由于此刻質粒依然以附加的形式存在,很少結合進宿主基因組.因而,mRNA或蛋白質產品必須在短時刻內（1～3天）進行測定,不然隨著細胞的成長和割裂,質粒會被降解或稀釋.雖然瞬時轉染剖析法具有多種局限性,但該辦法依然常用于對順式效果DNA序列和調控基因表達的反式因子進行開始剖析.
瞬時轉染剖析法方便、簡略,易于對成果定量,因而變成啟動子功用剖析的辦法.
瞬時轉染剖析法也有兩個首要局限性：首要在被轉染的細胞中,質粒的人工構象和拷貝數可能會致使特異性調控元件失活或具有特異功用;其次,瞬時轉染剖析法不能用于檢查那些需誘導或分解時刻超越48～72小時時刻期限的研討.
2.安穩轉染剖析法
對在瞬時轉染剖析中未表現出預期活性的調控區,或依賴于特異染色質構造的調控區,能夠選用安穩轉染剖析法,即將富含報告基因的意圖基因調控質粒安穩地結合進基因組.此外,還需將由組成型啟動子控制的抗藥性基因（如顯性挑選符號基因）安穩地結合進基因組進行剖析.抗藥性基因能夠和報告基因在同一個質粒上,也能夠在不一樣質粒上.將富含報告基因和抗藥性基因的質粒轉染培育細胞,培育基中參加能殺死不安穩表達抗藥性基因細胞的藥物,有些質粒被安穩地結合到染色體上.大都情況下,在細胞中多個質粒分子彼此相連構成多聯體,多聯體隨機結合到多聯體基因組中,因而每個被安穩轉染的細胞都具有共同的結合位點.然后經過測定被安穩轉染細胞中報道基因的活性,來斷定意圖調控區的活性.
安穩轉染剖析辦法的首要長處是,進行剖析的調控區及報道基因一般坐落近乎天然的染色質構象中,具有近乎天然的拷貝數,這些特色使調控區能更地模仿正常功用.在安穩轉染剖析中,因對轉染的細胞進行了挑選性擴增,所以戰勝子瞬轉細胞吸收DNA少的缺陷.安穩轉染剖析的另一個特色是對隨后的轉錄剖析沒有時刻約束.因而,安穩轉染對所需時刻相對較長的研討十分有用.安穩轉染剖析的缺陷是由于要進行藥物挑選和細胞擴增,因而操作難度較大,需求的時刻較長.
3.體外轉錄剖析法
體外轉錄剖析法適用于難以轉染的細胞、在轉染剖析中不能發生具有可檢查活性的啟動子或進行基因調控更研討.該剖析辦法的一個明顯特色是不需求斷定有效的轉染條件,并且能夠在體外反響系統中參加抗體,參加或去掉某些轉錄因子,以評估特定轉錄因子的功用.
4.轉基因剖析法
轉基因剖析法是將報告基因和意圖調控區安穩地隨機結合到動物基因組中,以檢查天然的前后序列中調控區的活性.該剖析辦法能用于承認轉染剖析中判定的特定調控區或調控元件.
5.同源重組剖析法
同源重組剖析法很少用,僅在培育細胞或動物基因組中對內源基因進行操作.