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公司動態

人elisa試劑盒實驗操作流程

閱讀:97          發布時間:2016-9-27

人ELISA試劑盒雙抗夾心法操作流程:
1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。
2.加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3.加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時,洗滌。
4.加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。
5.終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
6.結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。 
人ELISA試劑盒檢測未知抗體的間接法
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,
2.次日洗滌3次;
3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌;
4.(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml;
5.37℃孵育30-60分鐘,洗滌;
6.’zui后一遍用DDW洗滌。
7.加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。
8.終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
9.結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
IFN- Beta (Interferon Beta) human    干擾素-β抗原
PSCA    前列腺干細胞抗原
Agrin peptide    聚集蛋白抗原
ATP citrate lyase/ACLY    三磷酸腺檸檬酸裂解酶
AEBP1 (Adipocyte enhance binding protein 1)    脂肪細胞增強結合蛋白1
phospho-AMPK alpha 1(Thr172) peptaide    磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1
ADM 1-52/AM 1-52/Adrenomedullin 1-52    腎上腺髓質素(1-52)
Amyloid protein precursor    淀粉樣肽前體蛋白(多肽抗原)
ACTH(1-39)    促腎上腺皮質激素(1-39)
Adiponectin    脂聯素(多肽抗原)
Acetyl CoA Carboxylase    乙酰輔酶A羧化酶
Alkaline Phosphatase/ALP/AP    堿性磷酸酶
人ELISA試劑盒

 

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