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以FaTEx-gen快速凈化萃取套組搭配液相層析串聯(lián)質(zhì)譜分析谷類(lèi)樣體中之多重霉菌毒素

應(yīng)用批注

霉菌毒素

緒論

霉菌毒素為霉菌增殖時(shí)產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物，常見(jiàn)于生活中，且霉菌的孢子能透過(guò)空氣、風(fēng)力、水流和動(dòng)物等方式來(lái)傳播。只要有少量蛋白質(zhì)、淀粉、脂質(zhì)及水份，就是適合真菌生長(zhǎng)的環(huán)境，因此麥類(lèi)、果實(shí)類(lèi)、玉米及花生都是真菌主要的生長(zhǎng)處。黃曲毒素具有潛在性的肝毒害（hepatoxin）及致癌性，其化學(xué)特性使其能于運(yùn)輸儲(chǔ)存期間穩(wěn)定存在，因此霉菌毒素易出現(xiàn)在食物鏈中；且除了直接食用受感染的食物，也可能透過(guò)喂食受污染飼料給動(dòng)物而間接暴露于相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)。

　　霉菌毒素污染食品和飼料對(duì)于全球性作物及動(dòng)物養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)影響甚巨，據(jù)估計(jì)每年約25%農(nóng)作物受到不同程度的霉菌毒素影響，單以美國(guó)和加拿大而言，真菌毒素即造成飼料業(yè)和家畜業(yè)每年損失約50億美金(IFST, 2006)。

　　本篇應(yīng)用以FaTEx-gen快速凈化萃取套組進(jìn)行前處理，搭配LC-MS/MS檢測(cè)黃曲毒素的含量，建立一套快速的檢測(cè)方法，利于維護(hù)飼料質(zhì)量及相關(guān)作物食品安全。

摘要

本研究以FaTEx快速凈化萃取套組，分析谷類(lèi)樣品中之十一項(xiàng)霉菌毒素，包含黃曲毒素類(lèi)、赭曲毒素A及鐮孢菌毒素類(lèi)（伏馬毒素、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（嘔吐毒素）、玉米赤霉毒素等），項(xiàng)目列表詳見(jiàn)表1。

　　針對(duì)霉菌毒素的檢測(cè)，通常會(huì)依其種類(lèi)選用相對(duì)應(yīng)的特化免疫親和管進(jìn)行分析。此類(lèi)免疫親和管柱的分析效能具有專(zhuān)一性，因此能分析的項(xiàng)目較限縮，通常為專(zhuān)項(xiàng)，或者有較多項(xiàng)的例如黃曲毒素專(zhuān)用管則可同時(shí)分析黃曲毒素 B1、B2、G1、G2四項(xiàng)。然而在欲達(dá)成各種類(lèi)多重毒素分析的目的時(shí)，于檢測(cè)時(shí)程上便會(huì)較耗時(shí)，且使用相對(duì)應(yīng)特化管柱的成本也高許多。

　　本篇使用FaTEx凈化套組，搭配ZORBAX Eclipse Plus C18通用管柱及Agilent 6470液相層析串聯(lián)式質(zhì)譜儀，檢測(cè)黃豆及花生樣品，樣品之標(biāo)準(zhǔn)品添加濃度如表二；樣品制備流程如下，樣品秤樣后加標(biāo)靜置，加入12mL 70:30 (v:v)乙腈/水溶液（含0.5%甲酸）以高速震蕩機(jī)震蕩30分鐘，于3500rpm離心5分鐘，取上清液5mL經(jīng)過(guò)FaTEx套組凈化，取檢液1.2mL以氮?dú)獯抵廖⒏?，再?mL 50:50 (v:v)乙腈/水溶液回溶。分析結(jié)果如表三所示，回收率落在81.9~112.7%范圍內(nèi)，CV%皆小于20，顯示此為一快速、穩(wěn)定之檢驗(yàn)方法。

前處理步驟

液相層析參考條件

移動(dòng)相流速：0.4 mL/min

進(jìn)樣體積：5µL

層析管柱：ZORBAX Eclipse Plus C18   Rapid Resolution HD   1.8μm,內(nèi)徑3.0 × 100 mm

流動(dòng)相溶液

表1、霉菌毒素11項(xiàng)藥劑之多重反應(yīng)偵測(cè)模式參數(shù)

結(jié)論

本篇以FaTEx-gen萃取凈化套組搭配ZORBAX Eclipse Plus C18管柱于液相串聯(lián)質(zhì)譜之分析方法，檢測(cè)谷類(lèi)樣品（黃豆及花生）之多重霉菌毒素（黃曲毒素類(lèi)、赭曲毒素A及鐮孢菌毒素類(lèi)）共11項(xiàng)，每次分析時(shí)間13分鐘，為快速之檢驗(yàn)方法。

FaTEx-gen萃取凈化套組可針對(duì)復(fù)雜檢體基質(zhì)加強(qiáng)凈化，降低基質(zhì)干擾。

以FaTEx-gen套組檢測(cè)添加多重毒素標(biāo)準(zhǔn)品之谷類(lèi)樣品（添加濃度：黃曲毒素B1 Aflatoxin B1,黃曲毒素B2  Aflatoxin B2,  黃曲毒素G1  Aflatoxin G1,  黃曲毒素G2 Aflatoxin G2,赭曲霉毒素 A  Ochratoxin A：2.5 ng/g，T-2 toxin, HT-2 toxin：5 ng/g；嘔吐毒素Deoxynivalenol, 玉米赤霉烯酮 Zearalenone：25 ng/g；伏馬毒素 B1  Fumonisin B1,伏馬毒素 B2  Fumonisin B2：100 ng/g）回收率落在81.9~112.7%范圍內(nèi)，變異系數(shù)皆小于20，為穩(wěn)定之檢驗(yàn)方法。