物質名稱

• 英文名稱：DyLight 594 Maleimide Phalloidin（DyLight 594 MAL 鬼筆環肽）

• 中文名稱：DyLight 594 馬來酰亞胺標記鬼筆環肽

制備步驟

1. 鬼筆環肽的純化

鬼筆環肽的制備起始于天然毒素的提取。毒蕈（如鵝膏菌）中提取的粗毒素通過色譜技術（如離子交換色譜和凝膠過濾色譜）分離純化，獲得高純度的鬼筆環肽。純化后的鬼筆環肽需通過高效液相色譜（HPLC）驗證其純度，確保后續修飾的可靠性。

2. DyLight 594馬來酰亞胺染料的合成

DyLight 594是一種近紅外熒光染料，其馬來酰亞胺衍生物（DyLight 594 MAL）通過化學合成制備。以DyLight 594羧酸衍生物為起始原料，與馬來酰亞胺活性試劑（如N-羥基琥珀酰亞胺馬來酰亞胺）在縮合劑（如EDC或DCC）作用下反應，生成DyLight 594馬來酰亞胺染料。產物需通過薄層色譜（TLC）和質譜（MS）確認結構。

3. 鬼筆環肽的馬來酰亞胺修飾位點選擇

鬼筆環肽分子中含有游離的巰基（-SH），通常位于半胱氨酸殘基上。為避免破壞其與F-肌動蛋白的結合能力，修飾反應需控制馬來酰亞胺染料的摩爾比（通常為1:1至1:3），以確保僅有一個巰基被標記。

4. 化學偶聯反應

將純化的鬼筆環肽溶解于緩沖液（如磷酸鹽緩沖液，pH 7.4），加入DyLight 594 MAL染料，在惰性氣體（如氮氣）保護下室溫反應4-12小時。反應體系中可加入抗氧化劑（如DTT）以減少巰基氧化副反應。

5. 產物純化與鑒定

反應完成后，通過凝膠過濾色譜或HPLC去除未反應的染料和副產物。純化后的DyLight 594 MAL 鬼筆環肽通過紫外-可見光譜（UV-Vis）和熒光光譜驗證其吸收峰（DyLight 594特征峰約594 nm）和熒光特性。

6. 濃度標定與儲存

產物通過氨基酸分析或紫外吸收法（ε=約150,000 M?1cm?1）測定濃度，最終分裝于緩沖液（含0.1% BSA或疊氮鈉作為穩定劑）中，避光保存于-20℃。

特性與注意事項

• 熒光特性：DyLight 594 MAL 鬼筆環肽在激發光594 nm下發射紅色熒光，適用于共聚焦顯微鏡或流式細胞術。

• 穩定性：標記后的鬼筆環肽對F-肌動蛋白的結合親和力與天然鬼筆環肽相近，但需避光以防止染料光漂白。

• 應用限制：僅限體外實驗使用，不可用于活體成像（因馬來酰亞胺基團可能引發非特異性反應）。

產地：西安瑞禧生物

用途：科研

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