文章標(biāo)題：Hcclm3細(xì)胞，高轉(zhuǎn)移潛能人肝癌細(xì)胞

產(chǎn)品名稱：Hcclm3細(xì)胞

中文名稱：高轉(zhuǎn)移潛能人肝癌細(xì)胞株

培養(yǎng)條件：培養(yǎng)基：     1640 +10%FBS

          氣相：空氣95%，二氧化碳5%

          溫度：37℃

細(xì)胞形態(tài)：上皮樣

生長狀態(tài)：貼壁生長

Hcclm3細(xì)胞，高轉(zhuǎn)移潛能人肝癌細(xì)胞

細(xì)胞總數(shù)：1~3*106

傳代周期：2-3天

傳代比例：1:2~1:4

換液頻率：2-3天

凍存液：90%FBS+10%DMSO

細(xì)胞狀態(tài)： 良好

對于貼壁細(xì)胞，若細(xì)胞漂?。号囵B(yǎng)瓶不開封，用75%酒精擦拭后平躺置于培養(yǎng)箱內(nèi)。次日觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，換成新鮮的培養(yǎng)基；如細(xì)胞還不貼壁，將細(xì)胞離心收集移到新的培養(yǎng)瓶中，原培養(yǎng)瓶加部分新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。對于懸浮細(xì)胞：收到細(xì)胞后，將細(xì)胞全部離心，去掉舊的培養(yǎng)基，換成新鮮的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

特別注意：（如使用公共實驗室或者初次接觸，建議添加雙抗培養(yǎng)）

（1）貼壁細(xì)胞收到當(dāng)天有少量或沒有飄忽的細(xì)胞可以當(dāng)天換液，因為路途顛簸造成大量飄忽的情況時，請將細(xì)胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育到第二天再做消化傳代，請優(yōu)先選擇直徑6cm的培養(yǎng)皿進行傳代培養(yǎng)

（2）收到細(xì)胞后請盡快更換為含10%血清的新鮮培養(yǎng)基，如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶，請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加10%的血清，（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間zui長不宜超過72小時）

（3）如簽收時出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂，漏液等情況請及時做好照片記錄并SUER技術(shù)人員

細(xì)胞接收后的操作流程與注意事項：

1）貼壁細(xì)胞生長緩慢；適當(dāng)提高血清濃度（zui高不能超過20%），或可根據(jù)該細(xì)胞生長特性生長密度，考慮胰酶消化后，轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)

2）如果細(xì)胞為貼壁細(xì)胞，而收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài)，請將懸浮的細(xì)胞即時離心，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天；同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基培養(yǎng)3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細(xì)胞都沒有出現(xiàn)增值而是繼續(xù)脫落死亡，請及時實驗室技術(shù)人員會跟進解決

3）生長不均：貼壁細(xì)胞若出現(xiàn)分布不均，成島狀生長，可將細(xì)胞進行消化，重懸打散細(xì)胞，加入新鮮培養(yǎng)基進行培養(yǎng)

細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（請嚴(yán)格遵照無菌操作）

（1）吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細(xì)胞兩次，加2-3ml 0.25%胰酶進行消化細(xì)胞（注意把握消化時間，通常控制在1-2min）

（2）注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項操作或者凍存

（3）取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

（4）鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞生長特性邊緣縮小，貼壁松動時（不建議消化到細(xì)胞漂浮）去掉胰酶，加6-8ml*培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。

請各位老師以隨貨說明為主

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來源：慧穎生物細(xì)胞庫