糖基化修飾是生命活動中zui廣泛、zui重要的蛋白質翻譯 后修飾之一，不僅影響著蛋白質的空間構象、生物活 性、運輸和定位，而且在分子識別、細胞通信、信號轉 導等特定生物過程中發揮著至關重要的作用。糖蛋白根 據其糖鏈結構及糖基化位點主要有N-糖蛋白與O-糖蛋白 兩大類。據推斷，有超過50%的蛋白質都發生了糖基化修 飾，但由于糖基化的高度復雜性，絕大多數糖蛋白尚未 被發現，現有數據庫中只有約10%的蛋白質被注釋為糖蛋 白[1]。
糖鏈的組成與結構非常復雜，糖鏈為非模板 合成且呈二維結構，糖苷鍵連接位置和構象的不同都會 形成差異的精細結構。據報道，僅僅由6 個不同單糖組成 的寡糖鏈，其結構就可能達到驚人的1012種[2]。其次，當組 成與結構各異的糖鏈連接在蛋白質上形成糖蛋白時，又 構成微觀不均一性，即糖基化位點上糖鏈結構多樣化的 問題，一個蛋白可能存在多個糖基化位點，而每個位點 上又可能存在多種結構的糖鏈[3]。 隨著以單抗為代表的糖蛋白藥物的開發，質譜已廣泛應 用于糖基化解析，通常先利用酶切或化學手段將糖鏈從 糖蛋白釋放，再分別進行糖基化位點的鑒定和糖鏈結構 的解析[4]。然而針對完整糖肽的解析，目前尚無成熟技 術。本文利用新一代組合型質譜LTQ-Orbitrap Elite具有的 HCD/ETD“雙碎裂模式”，解析一種復雜糖蛋白的完整糖 肽，利用Byonic與SimGlycan軟件解析，成功發現2個N- 糖基化位點，16個O-糖基化位點，83種位點特異性糖鏈組 成與結構信息，在未脫糖狀態下使蛋白序列覆蓋度高達 92.1%。
使用儀器：LTQ-Orbitrap Elite組合型高分辨質譜儀
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