12381 凱杰Qiagen無(wú)內(nèi)*素宏量質(zhì)粒提取試劑盒5T EndoFree Plasmid Mega Kit ，產(chǎn)品介紹：
產(chǎn)品品牌：Qiagen
產(chǎn)品貨號(hào)：12381
產(chǎn)品名稱：無(wú)內(nèi)*素宏量質(zhì)粒提取試劑盒
英文名稱：EndoFree Plasmid Mega Kit
產(chǎn)品規(guī)格：5T

凱杰Qiagen12381無(wú)內(nèi)*素宏量質(zhì)粒提取試劑盒EndoFree Plasmid Mega Kit 5T

凱杰QIAGEN作為創(chuàng)新市場(chǎng)和技術(shù)的領(lǐng)dao者，憑借強(qiáng)大的樣本制備和分析技術(shù)，實(shí)現(xiàn)各種生物樣本內(nèi)容物的高品質(zhì)純化、分析。我們致力于幫助客戶在生命科學(xué)研究、應(yīng)用檢測(cè)、制藥、和分子診斷領(lǐng)域獲得成功和突破性進(jìn)展。由此讓生活的改善成為可能。我們秉承市場(chǎng)、客戶、病患至上的理念，不斷推進(jìn)多領(lǐng)域的創(chuàng)新和發(fā)展，充分發(fā)揮我們的樣本制備和分析技術(shù)專長(zhǎng)

我們北京諾博萊德科技有限公司作為QIAGEN公司的特約經(jīng)銷商為客戶提供，正規(guī)進(jìn)口，貨期穩(wěn)定，折扣好的服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。

12381 凱杰Qiagen無(wú)內(nèi)*素宏量質(zhì)粒提取試劑盒5T EndoFree Plasmid Mega Kit ，產(chǎn)品介紹：
產(chǎn)品品牌：Qiagen
產(chǎn)品貨號(hào)：12381
產(chǎn)品名稱：無(wú)內(nèi)*素宏量質(zhì)粒提取試劑盒
英文名稱：EndoFree Plasmid Mega Kit
產(chǎn)品規(guī)格：5T

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12381 凱杰Qiagen無(wú)內(nèi)*素宏量質(zhì)粒提取試劑盒5T EndoFree Plasmid Mega Kit ，產(chǎn)品說(shuō)明：

特征

• 達(dá)到小于 0.1 EU/μg DNA

• 綜合內(nèi)*素去除

• 高拷貝質(zhì)粒 DNA 的高產(chǎn)量

• LyseBlue      可實(shí)現(xiàn)*佳裂解和*大 DNA 產(chǎn)量

產(chǎn)品詳情

無(wú)內(nèi)切質(zhì)粒試劑盒提供基于陰離子交換的快速無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒 DNA 純化。QIA過(guò)濾器濾芯可通過(guò)過(guò)濾快速清除裂解物。純化的DNA純度超過(guò)2 x CsCl梯度離心獲得的純度，適用于高級(jí)轉(zhuǎn)染級(jí)應(yīng)用。EndoFree質(zhì)粒緩沖液組合可用于制備10 mega或5 giga轉(zhuǎn)染級(jí)質(zhì)粒或cosmid DNA制劑。

Performance

EndoFree質(zhì)粒試劑盒將高效的內(nèi)毒素去除步驟集成到質(zhì)粒純化程序中——無(wú)需額外的提取或親和柱來(lái)去除脂多糖。細(xì)菌裂解物通過(guò)QIAfilterMega-Giga或Maxi濾芯過(guò)濾進(jìn)行清除，質(zhì)粒DNA在含有陰離子交換樹(shù)脂的重力流QIAGEN尖duan上純化。從培養(yǎng)物中純化 DNA 可獲得高達(dá) 10 mg （giga）、2.5 mg（兆）和 500 μg（*大）的純化 DNA（培養(yǎng)體積取決于質(zhì)粒拷貝數(shù)、插入片段大小、宿主菌株和培養(yǎng)基）。純化的DNA不含內(nèi)*素（<0.1 EU/μg DNA）。

對(duì)于低拷貝質(zhì)粒和cosmid的純化，由于所需的培養(yǎng)體積大且QIAfilter超千兆質(zhì)粒試劑盒的容量有限，因此EndoFree質(zhì)粒Mega試劑盒是比EndoFree Giga質(zhì)粒試劑盒更好的選擇。

無(wú)內(nèi)切質(zhì)粒試劑盒可去除裂解步驟中釋放的細(xì)菌內(nèi)*素，并影響DNA轉(zhuǎn)染到原代細(xì)胞和敏感培養(yǎng)細(xì)胞中。從EndoFree質(zhì)粒試劑盒獲得的無(wú)內(nèi)*素DNA非常適合在轉(zhuǎn)染中獲得可重復(fù)且可靠的結(jié)果。QIAGEN超純無(wú)內(nèi)*素DNA也適用于基因治療研究和其他敏感應(yīng)用。

質(zhì)粒制劑中的內(nèi)*素水平*

EndoFree DNA可提高原代細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率*

*原代兔胃壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染用按所示方法制備的pEGFP-N2（CLONTECH）。使用Effectene轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行轉(zhuǎn)染。數(shù)據(jù)表示表達(dá)GFP的細(xì)胞百分比，通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)染后48小時(shí)的綠色熒光細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行評(píng)分來(lái)確定。每種純化方法的轉(zhuǎn)染效率代表來(lái)自6種以上不同DNA制備的9至2個(gè)重復(fù)培養(yǎng)皿的平均效率。（數(shù)據(jù)由美國(guó)佐治亞州奧古斯塔佐治亞醫(yī)學(xué)院分子醫(yī)學(xué)和遺傳學(xué)系 C. Chew 和 J. Parente 提供。

Principle

純化質(zhì)粒DNA中的內(nèi)毒素污染水平取決于所使用的純化方法。二氧化*漿液純化的DNA表現(xiàn)出ji高的內(nèi)*素水平。QIAGEN、QIAfilter和HiSpeed質(zhì)粒試劑盒以及2x CsCl超速離心可產(chǎn)生非常純的DNA，內(nèi)*素水平相對(duì)較低。EndoFree 質(zhì)粒試劑盒包括一個(gè)集成的內(nèi)*素去除步驟，可產(chǎn)生含有 <0.1 EU/μg 質(zhì)粒 DNA 的質(zhì)粒 DNA。

QIAfilter試劑盒以QIAfilter、HiSpeed和EndoFree質(zhì)粒試劑盒形式提供，是特殊的過(guò)濾裝置，旨在取代細(xì)*細(xì)胞堿性裂解后的離心。QIAfilter濾芯可wan全去除SDS沉淀物并清除細(xì)*裂解物，所需時(shí)間僅為離心所需時(shí)間的一小部分，從而將質(zhì)粒純化時(shí)間縮短多達(dá)1小時(shí)。QIAfilter超級(jí)千兆濾芯在室內(nèi)真空下運(yùn)行，以*小的努力有效地清除大量細(xì)菌裂解物（請(qǐng)注意，瓶子不包括在套件中）。QIAfilter Maxi 濾芯具有注射器形式，通過(guò)將液體推入過(guò)濾器，可在幾秒鐘內(nèi)清除裂解物。

QIAGEN-tips中du特的陰離子交換樹(shù)脂專為核酸純化而開(kāi)發(fā)。其zhuo越的分離特性使DNA純度等于或優(yōu)于連續(xù)兩輪CsCl梯度離心獲得的DNA純度。預(yù)包裝的QIAGEN吸頭通過(guò)重力流運(yùn)行，永bu干涸，*大限度地減少了質(zhì)粒制備所需的手動(dòng)操作時(shí)間。整個(gè)QIAGEN質(zhì)粒純化系統(tǒng)避免使用ben酚、氯仿、溴化乙錠和氯化銫等有*物質(zhì)，*大限度地減少對(duì)用戶和環(huán)境的危害。

內(nèi)*素，也稱為脂多糖或LPS，是大腸桿菌等革蘭氏陰性細(xì)菌的細(xì)胞膜成分。內(nèi)*素在質(zhì)粒純化的裂解步驟中釋放，并顯著降低內(nèi)*素敏感細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染效率。此外，內(nèi)毒素可以通過(guò)與DNA競(jìng)爭(zhēng)“游離"轉(zhuǎn)染試劑來(lái)影響轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中質(zhì)粒DNA的攝取。內(nèi)毒素還會(huì)誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞和B細(xì)胞等免疫細(xì)胞中免疫應(yīng)答的非特異性激活，從而導(dǎo)致對(duì)轉(zhuǎn)染結(jié)果的誤解。這些反應(yīng)包括誘導(dǎo)蛋白質(zhì)和脂質(zhì)的合成，如IL-1和前列腺素。總體而言，內(nèi)*素是轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)設(shè)置中不可控的變量，會(huì)影響結(jié)果和結(jié)果的可重復(fù)性，使其難以比較和解釋。在基因治療研究中，內(nèi)毒素可以通過(guò)引起內(nèi)毒性休克綜合征和補(bǔ)體級(jí)聯(lián)反應(yīng)的激活來(lái)干擾。

Procedure

細(xì)菌細(xì)胞在堿性條件下裂解，并使用QIAfilter濾芯清除粗裂解物。在此階段，將內(nèi)*素去除緩沖液添加到過(guò)濾后的裂解物中，在冰上孵育。然后將澄清的裂解物加載到陰離子交換尖duan，質(zhì)粒DNA在適當(dāng)?shù)牡望}和pH條件下選擇性結(jié)合。通過(guò)中鹽洗滌除去RNA、蛋白質(zhì)、代謝物和其他低分子量雜質(zhì)，并在高鹽緩沖液中洗脫超純質(zhì)粒DNA。DNA通過(guò)異丙醇沉淀濃縮和脫鹽，并通過(guò)離心收集。

Applications

使用無(wú)內(nèi)切質(zhì)粒試劑盒純化的DNA適用于任何敏感應(yīng)用，包括：

l  轉(zhuǎn)染，包括原代細(xì)胞、敏感細(xì)胞和懸浮細(xì)胞

l  基因治療研究

l  基因沉默

l  注射

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