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- 氯化鈣法
- 電轉農桿菌感受態
| 實驗方法原理 | 在基因工程操作中，感受態細胞的制備和質粒的轉化是一項基本技術。感受態是細菌細胞具有的能夠接受外源DNA的一種特殊生理狀態。農桿菌的感受態可用CaCl2處理而誘導產生。將正在生長的農桿菌細胞加入到低滲的CaCl2溶液中，0℃下處理便會使細菌細胞膜的透性發生改變，此時的細胞呈現出感受態。制備好的農桿菌感受態細胞迅速冷凍于-70℃可保存相當一段時間而不會對其轉化效率有太大的影響。 |
|---|---|
| 實驗材料 | |
| 試劑、試劑盒 | |
| 儀器、耗材 | |
| 實驗步驟 | |
農桿菌轉化注意事項： 1. 感受態盡量新，而且不要太濃（0.3-0.5）； 2. CaCl2盡量新； 3. 涂板只加Kan 50mg/L，等出了菌落再加到100mg/L； 4. pBI121本身拷貝數低，轉化子可能長的就慢些； 5. LB營養沒有YEP豐富，其實關系不大； 6. 4404不好用，能用105就不要用4404，105轉化效率通常比4404好的多 。
發表于2006-08-01 23:17
從農桿菌中可以抽出質粒，但做不了酶切試驗，原因是： 1. 量太少，主要是菌裂解困難，以及農桿菌雙元載體攜帶的是低拷貝復制子； 2. 雜質太多，酶切后呈現smear帶，無法判斷是否有目標基因。
