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標簽： 限制性內(nèi)切酶 消化 DNA
影響限制性內(nèi)切酶反應(yīng)的因素很多。DNA制品中的污染均能抑制酶切活性。這種抑制可通過增加酶作用單位數(shù)、增大反應(yīng)體枳以稀釋可能的抑制劑或延長反應(yīng)時間來加以克服。
實驗方法
- 單酶單DNA樣品消化
- 消化多個DNA
- 部分消化
| 實驗方法原理 | 進行限制酶切割反應(yīng)只需簡單地將酶和DNA樣品放在合適的反應(yīng)緩沖液溫育，其中DNA和酶的量、緩沖液的離子強度、溫育溫度和時間都依具體的反應(yīng)而改變。 |
|---|---|
| 實驗材料 | DNA |
| 試劑、試劑盒 | TE 酶切緩沖液 EDTA |
| 儀器、耗材 | 電泳儀 |
| 實驗步驟 | 1. 混合下列溶液于一個無菌的微量離心管中
2. 加入限制性內(nèi)切酶（1~5 U/μg DNA）在推薦的溫度溫育1 h （—般是37℃）。
5. 加入5 μl 電泳加樣緩沖液終止反應(yīng)，進行瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠電泳。
|
