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感受態專題:細胞瞬時轉染

2013-11-6  閱讀(1112)

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原理:

通過脂質體介導轉染法及電穿孔等基因轉染技術,將靶基因導入細胞,一般在轉染后48小時左右,靶基因即可在細胞內表達。根據不同的實驗目的,48小時后即可進行靶基因表達的檢測等實驗。

應用:

觀察目的基因及其表達蛋白在某種細胞中的功能(短時間即可進行觀察,但效應會很快丟失)。

一般流程:

1)細胞接種:轉染實驗前天接種細胞,各種細胞的平板密度依據各種細胞的生長率和細胞形狀而定。進行轉染當天細胞密度應達到60%~80%覆蓋。

2)細胞轉染(脂質體、電穿孔、FuGENE6等)

3)48小時以后鑒定目的基因的表達情況。

前期準備:

l構建好的外源基因載體,或目的基因基本信息。

l待轉染的細胞系(1×106個細胞,可傳代,倍增時間小于48小時)以及細胞培養條件的說明。

l若需要檢測靶基因的表達,請提供相應抗體。

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