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HPLC常見問題解決
閱讀：842 發布時間：2014-8-4
一、用HPLC進行分析時保留時間有時發生漂移，有時發生快速變化，原因何在?如何解決?
答：關于漂移問題：
1、溫度控制不好，解決方法是采用恒溫裝置，保持柱溫恒定
2、流動相發生變化，解決辦法是防止流動相發生蒸發、反應等
3、柱子未平衡好，需對柱子進行更長時間的平衡
關于快速變化問題
1、流速發生變化，解決辦法是重新設定流速，使之保持穩定
2、泵中有氣泡，可通過排氣等操作將氣泡趕出。
3、流動相不合適，解決辦法為改換流動相或使流動相在控制室內進行適當混合。
二、HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法?
答：1、樣品量不足：解決辦法為增加樣品量
2、樣品未從柱子中流出：可根據樣品的化學性質改變流動相或柱子
3、樣品與檢測器不匹配：根據樣品化學性質調整波長或改換檢測器
4、檢測器衰減太多：調整衰減即可。
5、檢測器時間常數太大：解決辦法為降低時間參數
6、檢測器池窗污染：解決辦法為清洗池窗。
7、檢測池中有氣泡：解決辦法為排氣。
8、記錄儀測壓范圍不當：調整電壓范圍即可。
9、流動相流量不合適：調整流速即可。
10、檢測器與記錄儀超出校正曲線：解決辦法為檢查記錄儀與檢測器，重作校正曲線。
三、做HPLC分析時，柱壓不穩定，原因何在?如何解決?
答：原因可能有：
1、泵內有空氣，解決的辦法是清除泵內空氣，對溶劑進行脫氣處理;
2、比例閥失效，更換比例閥即可。
3、泵密封墊損壞，更換密封墊即可。
4、溶劑中的氣泡，解決的辦法是對溶劑脫氣，必要時改變脫氣方法;
5、系統檢漏，找出漏點，密封即可。
6、梯度洗脫，這時壓力波動是正常的。
四、為什么HPLC柱驗收測試時柱壓過高?
答：柱壓過高是HPLC柱用戶zui常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問題，可按下面步驟檢查問題的起因。
1、拆去保護柱，看柱壓是否還高，否則是保護柱的問題，若柱壓仍高，再檢查;
2、把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查。
3、將柱子的進出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動相沖洗柱子，(此時不要連接檢測器，以防固體顆粒進入流動性)。這時，如果柱壓仍不下降，再檢查;
4、更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說明溶劑或樣品含有顆粒雜質，正是這些雜質將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請與廠商。