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直擊,小鼠飼養細胞制備
閱讀：2454 發布時間：2019-3-6 生物科研這件事真的是微妙微翹，有太多種變化，太多種可能發生。比如說在細胞融合后選擇性培養的過程中，就會有大量骨髓瘤細胞和脾細胞相繼死亡，此時單個或少數分散的雜交瘤細胞多半不易存活，通常必須加入其它活細胞使之繁殖。而這種被加入的活細胞稱之為飼養細胞（Feeder Cells）。飼養細胞促進其他細胞增殖的機制尚不明了，一般認為它們可能釋放非種屬特異性的生長ci激因子，為雜交瘤細胞提供必要的生長條件；也可能是為了滿足新生的雜交瘤對細胞密度的依賴性。在常用的飼養細胞中有胸腺細胞、正常脾細胞和腹水巨噬細胞。其中小鼠的腹腔巨噬細胞來源及制備較為方便，且有吞噬清除死亡細胞的作用，因此使用為方便。
下面就讓上海滬鼎生物科技有限公司帶您去看看制備方法：
1、小鼠（一般選取經產母鼠）脫頸椎致死，注意斷頸椎時盡量減少對腹腔的壓迫，避免損傷腹腔內血管，以防飼養細胞內含有大量血細胞。
2、將小鼠浸泡于75%酒精中5min，然后手提住小鼠尾巴，上下于酒精中涮洗數次。置于超凈臺無菌平皿中。
3、用無菌剪鑷從后腹剪開皮膚，沿兩側剪開皮膚，暴露腹部，注意不要損傷腹膜。用酒精棉球擦拭腹膜。
4、用注射器吸取6-8ml的不*培養基注射入腹腔，注意注射時用鑷子提起腹膜，避免針頭刺到腸管等腹腔臟器。
5、用棉球輕輕an摩腹部1min，吸出注入的培養液。
6、800-1000 r/min離心5-10 min，棄去上清。若腹腔血管損傷，沉淀中可見有紅細胞。
7、用5ml HAT培養基懸浮細胞，根據細胞計數結果，補加HAT培養基，使細胞濃度達2×105/ml。（一般情況下一只經產母鼠可鋪2-3塊96孔板。）
通常對巨噬細胞來說，96孔板每孔需要2×104個細胞，24孔板需105個細胞。每只小鼠可采~5×106個細胞，因此一只小鼠可供兩塊96孔板飼養細胞。
8、將上述細胞懸液加入96孔板，每孔0.1ml，37℃，6% CO2的培養箱培養。
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