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滬鼎生物分享：牛β乳球蛋白ELISA試劑盒使用手冊（新手適用）
閱讀：941 發布時間：2022-3-3【預期用途】
牛β乳球蛋白ELISA試劑盒主要用于測定牛乳樣本中β乳球蛋白（β-Lg）含量。
【檢測原理】
牛β乳球蛋白ELISA試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中牛β乳球蛋白（β-Lg）水平。用純化的牛β乳球蛋白（β-Lg）抗體被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入β乳球蛋白（β-Lg），再與HRP標記的β乳球蛋白（β-Lg）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的β乳球蛋白（β-Lg）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度SD值，通過標準曲線計算樣品中牛β乳球蛋白（β-Lg）濃度。
【牛β乳球蛋白ELISA試劑盒檢測范圍】
1、物理性能
試劑盒的各液體組分應澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應真空包裝，無破損漏氣(如有漏氣，不影響使用）。
2、劑量反應曲線線性
標準品劑量反應曲線相關系數r值，大于等于0.9900。
3、檢測范圍
6μg/L -220μg/L。
4、靈敏度
檢出劑量最小不能小于1.5μg/L。
5、精密度
精密度用樣品測定值的變異系數CV 表示。CV（%） = SD/mean×100批內差：取同批次試劑盒對低、中、高值定值樣本進行定量檢測，每份樣本連續測定20 次，分別計算不同濃度樣本的平均值及SD 值。批間差：選取3 個不同批次的試劑盒分別對低、中、高值定值樣本進行定量測定，每個樣本使用同一試劑盒重復測定10 次，分別計算不同濃度樣本的平均值及SD 值。
批內差： CV<5.3%
批間差： CV<9.1%
6、回收率
分別往5個不同樣本中添加已知濃度的目標蛋白，做回收實驗，得出回收率范圍和平均回收率。
7、線性
分別往5個樣本中添加已知濃度的目標蛋白，做回收實驗，得出回收率范圍及平均回收率。將5個樣本分別稀釋2倍，4倍，8倍，16倍做回收實驗，得出回收率范圍及平均回收率。
8、特異性
本試劑盒識別天然和重組牛β乳球蛋白（β-Lg），經檢測與其它相似物質無明顯交叉反應。由于受到技術及樣本來源的限制，不可能完成所有相關或相似物質交叉反應檢測，因此本試劑盒有可能與未經檢測的其它物質有交叉反應
。9、穩定性
經測定，試劑盒在有效期內務必按推薦溫度保存，活性降低率小于5%。為減小外部因素對試劑盒破壞前后檢測值的影，實驗室的環境條件需盡量保持一致，尤其是實驗室內溫度、濕度及溫育條件。其次由同一實驗員來進行操作可減少人為誤差。
【牛β乳球蛋白ELISA試劑盒樣本要求】
1.樣本類型和采集
血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置0.5-2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
細胞裂解液: 吸棄培養液，用PBS（0.01 M，pH 7.4）將細胞洗一遍。用細胞刮刮下細胞（不能用胰酶和EDTA 處理），加入2-5 mL PBS（0.01 M，pH 7.4）。懸浮細胞可省略。收集細胞懸液，4℃ 1000×g離心10min，棄去培養基，用預冷的PBS潤洗3次。加入適量的預冷PBS或非變性細胞裂解液（臨用前加入蛋白酶抑制劑）重懸細胞,通常6孔板一個孔的細胞量需要150-250μL PBS重懸。 將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品，反復凍融3次，使細胞充分裂解,也可將樣品進行超聲破碎，以達到裂解的目的。4℃ 10000×g 離心10min，除去細胞碎片，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。細胞培養物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2.樣本保存和穩定性
樣本在2-8℃條件下，可以儲存72h，在- 20℃或-80℃可以儲存6個月及以上。樣本收集后，不是一次檢測完，請按一次用量分裝凍存，避免反復凍融。
【牛β乳球蛋白ELISA試劑盒儲存條件及有效期】
1、2-8℃保存，切勿冷凍，有效期6個月。
2、開封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中，密閉自封袋，并將全部試劑放回2-8℃冰箱。
注意：試劑盒內酶標條可拆卸，按實驗需求可分多次使用；使用后的剩余試劑盒建議在實驗使用后1 個月內使用完畢。產品過期時間以盒子上的標簽為準，保質期內所有組分都確保是穩定的。
由于篇幅有限，完整版牛β乳球蛋白ELISA試劑盒的使用手冊請咨詢我司在線客服人員，也希望提供的信息給正在做科研的朋友們一些建議和參考。
β乳球蛋白ELISA試劑盒相關信息：
【產品名稱】牛β乳球蛋白ELISA試劑盒
【規格】96T(檢測85個樣本) /48T(檢測37個樣本)
【用途】僅供科研實驗，不用于任何臨床診斷及其他