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滬鼎推薦本周Z值得關注的實驗，述制備核提取物的完整過程
閱讀：1083 發(fā)布時間：2014-2-27 一周之中的工作日不過只有五天，時間的緊張是否讓您不知該瀏覽哪一個實驗了呢？不管是何事物，足夠才是zui重要的。今天已經周四了，滬鼎推薦本周zui值得關注的實驗，述制備核提取物的完整過程。上海滬鼎以質量求生存，以信譽求發(fā)展的精神，精益求精，力求做到更好！
本次實驗一共需要十二個步驟，看似麻煩，我們?yōu)槟饤l整理好，讓您了解中更明白。
1、①收集轉瓶培養(yǎng)的細胞：將濃度為5~10×108細胞/l 的培養(yǎng)液用1 L 的塑料瓶1 850 g 離心20 min，將細胞收入50 ml 錐形離心管中（每管收2~3 L 培養(yǎng)液中的細胞）。進行步驟2。②收集單層培養(yǎng)的細胞：單層細胞長滿后去掉培養(yǎng)液。用PBS洗1次。將細胞刮入新鮮PBS液里，倒進錐形離心管中。進行步驟2。
2、1 850 g 離心10 min。
3①轉瓶培養(yǎng)細胞：測量壓緊后細胞的體積。將細胞重懸于約5倍于其pcv的PBS液中，1 850 g 離心10 min。進行步驟4。②單層培養(yǎng)細胞：測量pcv，進行步驟4。
4、快速地將沉淀的細胞重懸于5倍體積的低滲緩沖液中，1 850 g 離心10 min。將細胞沉淀重懸于3倍于原pcv的低滲緩沖液中，放置在冰上10 min，讓細胞腫脹。
5、在Dounce氏玻璃勻漿器中用B號研杵緩饅上下抽提10次以上。用臺盼藍染色排斥法在顯微鏡下檢査細胞裂解滑況（應大于80%~90%）。
6、3 300 g 離心15 min，保留上清用來制備S-100細胞質提取物。
7、測量第6步離心沉淀的壓緊后的細胞核體積。用1/2 pnv體積的低鹽緩沖液重懸細胞核（必要時用Dounce氏玻璃勻漿器勻漿一次）。
8、在輕輕攪拌的同時，逐滴加入1/2 pnv體積的高鹽緩沖液。終濃度應約為300 mmol/l。
9、25 000 g 離心30 min，測量核提取物的電導率（用上請，見步驟10）。
10、將核提取物加入透析管中，在50倍體積的透析液中進行透析，直到提取物的電導率和透析液一致為止（當提取物的KCl濃度達到100 mmol/l 時）。盡量縮短透析時間。
11、將提取物從透析袋中移出45 000 g 離心20 min。
12、用Bradford分析法測定上清中蛋白質的濃度。分裝，浸入液氮中速凍，- 80℃保存。
以上就是制備核提取物實驗的十二個完整過程，感謝您對上海滬鼎的支持！在廣大客戶的支持和全體員工的努力下，公司正在日益發(fā)展和壯大。全體員工孜孜不倦為國內科研事業(yè)單位以及高校等提供的產品服務！