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冰凍切片氧化應激活性氧超氧陰離子原位染色試劑盒產品說明書

主要用途
冰凍切片氧化應激活性氧超氧陰離子原位染色試劑是一種旨在通過硝基藍四氮唑染料，受到超氧陰離子O2-的還原，產生不溶性藍黑色色素沉淀，來定性檢測冰凍切片組織細胞內超氧陰離子活性氧族的生成和增加的而經典的技術方法。該技術由大師級科學家精心研制、成功實驗證明的。可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、衰老、代謝和營養學等的研究。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，顯色清晰。
技術背景
超氧自由基陰離子（superoxide radical；O2-）、過氧化氫（hydrogen peroxide；H2O2）、羥自由基或氫氧基（hydroxyl radical；OH-）、過氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氫過氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、過氧亞硝基陰離子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、單線態氧氣（singlet oxygen）等細胞內活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的產生和增多，將導致細胞衰老或凋亡。染料四氮唑蘭（tetrazolium）化合物，包括硝基藍四氮唑（Nitro Blue Tetrazolium；NBT）和二甲基噻唑二苯基四唑嗅藍（3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide；MTT），一旦受到超氧陰離子O2-的直接還原，便產生不溶性甲暨色素。據此證明組織細胞內超氧陰離子活性氧族的存在。
產品內容
清理液（Reagent A） 毫升
染色液（Reagent B） 毫升
產品說明書 1份
保存方式
保存染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，嚴格避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月
用戶自備
細胞培養箱：用于組織細胞染色孵育
光學顯微鏡：用于觀察染色后的組織細胞
實驗步驟
1． 準備5片待測的厚為10微米的未經固著處理的冰凍切片
2． 置于室溫下，小心加上xx微升預冷的清理液（Reagent A），鋪滿整個切片表面
3． 小心移去切片上的清理液（Reagent A） 1
4． 小心加上xx微升室溫預熱的染色液（Reagent B），鋪滿整個切片表面
5． 在37℃濕潤培養箱里，孵育60分鐘（注意：避免液體蒸發）
6． 小心移去切片上的染色液（Reagent B），避免光照
7． 小心加上xx微升清理液（Reagent A），鋪滿整個切片表面
8． 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
9． 重復實驗步驟7和8二次
10．放上蓋玻片或封片
11．即刻置于光學顯微鏡下觀察：組織細胞呈現藍黑色，顯示超氧陰離子濃度增強
注意事項
1． 本產品為50次操作
2． 建議使用新鮮組織（手術切除后1小時內）制成的冰凍切片
3． 操作時，須戴手套
4． 孵育時，須避免光照
5． 組織染色前后的清洗過程中，小心操作，以免將組織沖洗掉
6． 如果超氧陰離子活性氧濃度過低，可以延長孵育時間至4小時
7． 建議切片染色完成后，即刻進行組織細胞觀察分析
8． 本公司提供系列活性氧檢測試劑產品
質量標準
1． 本產品經鑒定性能穩定
2． 本產品經鑒定顯色清晰