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支原體污染整體解決方案
------支原體檢測、預防、去除，一步到位！
支原體
支原體（Mycoplasma）又稱霉形體，是目前發現的最小的原核生物，直徑大小0.1~0.3μm，能通過濾膜且呈高度多形性，有球形、桿形、絲狀、分支狀等多種形態。實驗室和生物制品工廠在細胞培養過程中易受到支原體污染，據文獻報道：支原體污染在儲存細胞系中發生率約為 15%-35%，在生物制藥行業中約為0.44%-6.70% [1]。
圖1：支原體的形態
支原體污染的影響
細菌和真菌污染相對較容易檢測、預防和去除，但支原體造成的污染卻很難察覺，即使生長密度高達 107-109CFU/ml，也很難有污染跡象（比如溶液渾濁、pH變化等）。支原體污染后能導致細胞產生多種變化（見圖2）。
圖2：受支原體污染后細胞出現的相關狀態的改變
支原體污染解決方案——Yeasen三位一體幫您解決細胞支原體污染問題
翌圣生物（YEASEN）經過匠心開發并多次的實驗驗證，推出了清除支原體的試劑，包括：支原體檢測系列、支原體清除（培養箱、水浴鍋、超凈臺和細胞房）和支原體預防相關等。
圖3：yeasen支原體污染整體解決方案
一步法恒溫支原體檢測：
Yeasen一步法恒溫支原體檢測試劑采用等溫擴增技術，無需特殊儀器，1h就可以通過顏色判定檢測結果。檢測靈敏度是普通恒溫檢測的1000倍并添加了防污染組分，杜絕假陽性現象的發生。
圖4：一步法支原體檢測操作流程
PCR法支原體檢測：
Yeasen巢式PCR支原體檢測不同于普通的PCR檢測方法，將原有的1對引物提高至3對引物，針對支原體16s和23s保守區進行巢式PCR擴增，實現了準確度和靈敏度的雙重突破。
圖5: PCR法擴增含不同濃度支原體樣品獲得的凝膠電泳圖
qPCR法支原體檢測：
Yeasen的qPCR支原體檢測試劑盒（探針法）是基于EP藥典推薦NAT法推出超簡便快捷檢測方法，克服了普通PCR靈敏度低和培養法耗時久的問題，將結果精準度和使用便捷度有了質的提升！3h內可快速、簡便檢測支原體存無，優于培養法的28天耗時檢測過程。
圖6: qPCR法測試流程
產品數據
靈敏度和擴增效率測試
10 CFU/mL口腔支原體標準品檢出結果
10 CFU/mL肺炎支原體標準品檢出結果
10 CFU/mL豬鼻支原體標準品檢出結果 
10 CFU/mL精氨酸支原體標準品檢出結果
試劑盒擴增效率：101-108 copies/uL
擴增效率≥96%，標準曲線R2≥0.996
不同檢測方法對比
產品名稱 | 所需設備 | 檢測支原體種類 | 所需時間 | 檢測靈敏度 | 結果觀察 |
LAMP等溫擴增法 | PCR儀或水浴鍋 | 27種 | 1h | 103 | 肉眼觀察 |
巢式PCR法 | PCR儀和電泳儀 | 13種 | 3h | 10個拷貝 | 凝膠觀察 |
qPCR法 | PCR儀和定量PCR儀 | 105種 | 3h | 單拷貝 | Ct值判定 |
翌圣MycAwayTM 支原體去除試劑（1000×）是一種混合制劑，可通過抑制支原體生長所必須的相關蛋白合成來達到支原體清除效果且對細胞無傷害，挽救您的細胞，減少因支原體污染帶來的損失。
圖6：細胞去除效果的展示
支原體去除試劑的特點：
毒性低：對細胞毒性小，不影響后續細胞實驗，如細胞活力檢測和細胞轉染等；
穩定性強：-20℃試劑能較長時間保存并保持高效能；
操作簡單：只需將產品添加至支原體污染的培養基中孵育即可；
起效快：快3天即可見效；
去除范圍廣：能去除實驗室絕大多數支原體類型。
圖7：支原體去除試劑細胞毒性檢測圖示
提前做好支原體預防工作是降低支原體感染幾率的*的方法，yeasen開發的支原體預防系列產品，具有操作簡單、方便、穩定性好等特點。
TIPS
1）源頭預防
對于新引進或者原代分離的細胞，需要進行支原體檢測，檢測結果為陰性才可進入無菌室培養
2）實驗操作流程規范
穿戴細胞房專用實驗服并及時處理廢棄物
3）污染物的處理
一旦發現已經污染支原體的細胞，滅活后棄之并更換新的細胞，避免支原體大規模散播。
4）無菌室的維護
無菌室應每周做一次消毒，用0.1%新潔爾滅擦拭操作臺及可能污染的死角，開啟無菌空氣過濾器及紫外燈殺菌半小時。每月做一次全面清潔工作，先用去污染劑洗刷地面，再用含1%新潔爾滅的清水清洗地面，最后再滅菌30min。
文獻引用
[1] Fratz-Berilla EJ, Angart P, Graham RJ, et al. Impacts on product quality attributes of monoclonal antibodies produced in CHO cell bioreactor cultures during intentional mycoplasma coNATmination events. Biotechnol Bioeng. 2020;117(9):2802-2815.
類別 | 產品 | 貨號 | 規格 |
檢測 | MycAway™ -Color One-Step Mycoplasma Detection Kit Hot MycAway™ 一步法快速支原體檢測試劑盒 | 40612ES25/60 | 25/100 T |
MycAway™ Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit Hot MycAway™ 支原體qPCR檢測試劑盒（探針法） | 40618ES25/60 | 25/100 T | |
GMyc-PCR Mycoplasma Test Kit GMyc-PCR支原體檢測試劑盒 | 40601ES10/20 | 10/20 assays | |
去除 | MycAway™ Spray (Ready-to-use) 支原體噴霧劑（即用型） | 40605ES02/03 | 1/2×500 mL |
MycAway™ Treatment (1000×)-Mycoplasma Elimination Reagent MycAway™ 支原體去除試劑（1000×） | 40607ES03/08 | 1/5×1 mL | |
預防 | MycAway™Prophylactic (2000×)-Mycoplasma Prevention Reagent MycAway™ 支原體預防試劑（2000×） | 40608ES03/08 | 1/5×1 mL |
MycGuard™ -1 Solution (100×) 細胞培養箱水盤1號消毒衛士（支原體污染預防） | 40609ES60 | 100 mL | |
MycGuard™-2 Solution (500×) 水浴鍋2號消毒衛士（支原體污染預防） | 40610ES60 | 100 mL |
