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建庫作為NGS測序的核心步驟，直接影響測序質量，文庫轉化率是評估文庫質量的重要指標，高的文庫轉化率一定程度上意味著文庫豐富度、測序數據均一性更好。常規T4 DNA Ligase催化DNA的 3’-OH 和接頭的5’-磷酸基團之間形成磷酸二酯鍵完成接頭連接，但此過程中會出現片段自連，從而減低文庫轉化率，影響文庫豐富度與測序質量。翌圣ZymeEditor™酶改造平臺對T4 DNA Ligase進行定向改造獲得Hieff® 5' App T4 DNA Ligase（Cat#14960ES），該突變體只能以預苷化接頭為底物進行接頭連接，顯著減少片段自連，提高文庫轉化率。
圖1. NGS常規建庫流程
產品特點
1、極低片段自連：只能以預腺苷化的接頭為底物，極大降低片段自連。
2、超高接頭連接效率：連接效率達95%以上。
3、嚴格質控：無切口酶、外切酶及RNase殘留。
數據展示
圖2. 以170 bp模式片段為底物連接效率檢測
圖3. 以300 bp模式片段為底物連接效率檢測
圖4. RNase殘留檢測 C：陰性對照
3、無切口酶及外切酶殘留
將200 U Hieff® 5' App T4 DNA ligase與底物DNA孵育，瓊脂糖凝膠電泳比較DNA譜帶變化。結果顯示翌圣Hieff® 5' App T4 DNA ligase無切口酶殘留。
圖5. 切口酶殘留檢測 C：陰性對照
將2000 U Hieff® 5' App T4 DNA ligase與底物DNA孵育，瓊脂糖凝膠電泳比較DNA譜帶變化。結果顯示翌圣Hieff® 5' App T4 DNA ligase無外切酶殘留。
圖6. 外切酶殘留檢測 C：陰性對照
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常規接頭連接 | Hieff® Quick T4 DNA Ligase | 10301ES |
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文庫擴增 | Hieff Canace® Pro High-Fidelity DNA Polymerase(1 U/μL) | 14382ES |
翌圣ZymeEditor™酶改造定制服務
翌圣ZymeEditor™是一個酶改造底層技術平臺，它基于翌圣生物多年在分子酶改造領域中的技術積累與知識拓展，該平臺已具備對多種酶的多種需求進行定向改造的能力。因此，ZymeEditor™平臺從2023年開始正式推出酶改造對外定制服務，可為各種應用領域（如醫藥、診斷、食品、化工等）的客戶提供全套酶改造服務，也可以單獨提供蛋白發酵及純化工藝開發優化、規模化生產服務，以滿足不同客戶的需求，助力產業升級。
圖7.ZymeEditor™酶改造定制服務流程
