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當前位置:> 供求商機> Cell Counting Kit(CCK-8/WST-8)試劑盒
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檢測原理:
◆ Cell Counting Kit簡稱CCK8,(CCK-8/WST-8)試劑盒,是一種基于WST-8(化學名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。
◆ WST-8屬于MTT的升級產品,工作原理為:在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產物(formazan)。顏色的深淺與細胞的增殖成正比,與細胞毒性成反比。使用酶標儀在450mM波長處測定OD值,間接反映活細胞數量。
◆ CCK法應用非常廣泛,如藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢測等。
CCK方法的優勢:
◆ 表1 CCK法與其他細胞增殖/毒性檢測方法的優勢比較
MTT法 | XTT法 | WST-1法 | CCK法 | |
甲臜產物的水溶性 | 差(需加有機溶劑溶解再檢測) | 好 | 好 | 好 |
產品性狀 | 粉末 | 2瓶溶液 | 溶液 | 1瓶溶液 |
使用方法 | 配成溶液后使用 | 現配現用 | 即開即用 | 即開即用 |
檢測靈敏度 | 高 | 很高 | 很高 | 高 |
檢測時間 | 較長 | 較短 | 較短 | zui短 |
檢測波長 | 560-600nm | 420-480nm | 420-480nm | 430-490nm |
細胞毒性 | 高,細胞形態*消失 | 很低,細胞形態不變 | 很低,細胞形態不變 | 很低,細胞形態不變 |
試劑穩定性 | 一般 | 較差 | 一般 | 很好 |
批量樣品檢測 | 可以 | 非常適合 | 非常適合 | 非常適合 |
便捷程度 | 一般 | 便捷 | 便捷 | 非常便捷 |
◆ 酚紅和血清對CCK法的檢測不會造成干擾;
◆ 細胞毒性非常低,因此加入WST-8顯色后,可以在不同時間反復用酶標儀讀數從而找到*測定時間。
CCK法的操作步驟(更多內容請見說明書):
實驗一:細胞活性檢測
1、在96孔板中接種細胞懸液(100μL/孔)。將培養板放在培養箱中預培養(
2、向每孔加入10 μL CCK溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響OD值的讀數)。
3、將培養板在培養箱內孵育1-4小時。
4、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。
5、若暫時不測定OD值,可以向每孔中加入10 μL
實驗二:細胞增殖-毒性檢測
1、在96孔板中配置100μL的細胞懸液。將培養板在培養箱預培養24小時(
2、向培養板加入10μL不同濃度的待測物質。
3、將培養板在培養箱孵育一段適當的時間(例如:6、12、24或48小時)。
4、向每孔加入10μL CCK溶液(注意不要再孔中生成氣泡,它們會影響OD值的讀數)。
5、將培養板在培養箱內孵育1-4小時。
6、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。
7、若暫時不測定OD值,可以向每孔中加入10 μL
注意:如果待測物質有氧化性或還原性的話,可在加CCK之前更換新鮮培養基(除去培養基,并用培養基洗滌細胞兩次,然后加入新的培養基),去掉藥物影響。當然藥物影響比較小的情況下,可以不更換培養基,直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。
活力計算:
細胞活力*(%)=[A(加藥)-A(空白)]/[A(0加藥)-A(空白)] ×100
A(加藥):具有細胞、CCK溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A(空白):具有培養基和CCK溶液而沒有細胞的孔的吸光度
A(0加藥):具有細胞、CCK溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度
*細胞活力:細胞增殖活力或細胞毒性活力
保存條件:
產品報價:
貨號 | 名稱 | 產地 | 規格 | 報價(元) | 庫存 |
QF0025 | CCK-8(wst-8) | YEASEN | 100次/1ml | 150 | 是 |
QF0026 | CCK-8(wst-8) | YEASEN | 500次/5ml | 480 | 是 |
QF0027 | CCK-8(wst-8) | YEASEN | 1000T/10ml | 920 | 是 |
QF0028 | CCK-8(wst-8) | YEASEN | 3000T/30ml | 1833 | 是 |
QF0029 | CCK-8(wst-8) | YEASEN | 10000T/100ml | 5122 | 是 |
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