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人端粒酶(TE)檢測原理!

時間:2021/10/18閱讀:2489
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人端粒酶(TE)檢測原理!

端粒酶(Telomerase),在細胞中負責端粒的延長的一種酶,是基本的核蛋白逆轉錄酶,可將端粒DNA加至真核細胞染色體末端,把DNA復制損失的端粒填補起來,使端粒修復延長,可以讓端粒不會因細胞分裂而有所損耗,使得細胞分裂的次數增加。

產品名稱:人端粒酶(TE)ELISA檢測試劑盒

產品規格:96T

儲存條件:2-8℃,避光防潮保存

有效期:6個月

檢測原理:

試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人端粒酶(TE)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人端粒酶(TE)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

實驗步驟(僅供參考)

1.  從室溫平衡60min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

3.  待測樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;

4.  隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

試劑盒性能:

1.準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值,大于等于0.9900。

2. 靈敏度:zui低檢測濃度小于0.1 ng/ml。

3. 特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

4. 重復性:板內變異系數小于10%、板間變異系數小于15%。


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