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上海信帆為您提供熒光蛋白上樣緩沖液!

時間:2018-1-2閱讀:1223
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上海信帆為您提供熒光蛋白上樣緩沖液!

產品簡介:

熒光蛋白上樣緩沖液在電泳前的樣品處理階段對SDS-PAGE的蛋白樣品進行預染,標記上熒光。實驗完成以后,凝膠中或轉膜后的蛋白條可直接通過紫外燈、LED燈或其他數字成像系統進行觀察和分析,無需染色脫色。
熒光蛋白上樣緩沖液靈敏度高比銀染高。穩定性強,背景低??蓪λ械鞍走M行染色,不影響蛋白的遷移率與電泳圖譜。電泳過程中,游離的染料分子與溴酚藍的遷移速率一致,跑膠結束時 移至凝膠末端,背景干凈。熒光蛋白上樣緩沖液非常適合用于追蹤蛋白表達純化以及Western blot的SDS-PAGE。

使用步驟    

1. 請在使用前根據管壁標簽上的體積加入resuspension buffer重懸。Resuspension buffer在4℃可能會有沉淀產生,室溫下放置至沉淀消失。
2. 將用上樣緩沖液處理的蛋白樣品與待電泳蛋白樣品1:2混合。比如,3ul 上樣緩沖液 + 6ul 蛋白樣品。
3. 90-100℃加熱上述處理的樣品混合液5分鐘。細胞或組織樣品,加熱時間延長至10分鐘。確保加熱溫度>90℃使樣品充分受熱。
? 大部分預制膠(Bis-Tris體系除外)可以直接進行下一步。Bis-Tris體系的預制膠(如Life Technology),需加入20%已處理樣品體積的Enhancing buffer。比如,10ul已處理的樣品需加入2ul Enhancing buffer。
4. 樣品可以上樣進行電泳了(無需再加Loading Buffer處理)。
5. 電泳結束后,將凝膠放至透射儀上進行觀察和拍照。透射儀可以是紫外燈,藍光LED燈或其它凝膠成像系統。如果光源在可見光波長范疇的無需剝膠,因為可見波長范圍內的光可以穿透玻璃或塑料材質的膠板。
6. (可選的)如果有需要,經熒光蛋白上樣緩沖液處理的凝膠仍可進行考染。按標準的考染步驟進行即可。

上海信帆為您提供熒光蛋白上樣緩沖液!
 

注意事項:

1. 請勿使用該上樣緩沖液處理預染的或預處理的蛋白分子量標準。這些產品與熒光蛋白上樣緩沖液不兼容。
2. 靈敏度影響因素:GAO pH(大于7)不會影響染色,低pH則會降低染色的效率,如果樣品的pH低于5,建議將pH調整至7以上。
3. 熒光蛋白上樣緩沖液不適合在如下SDS-PAGE實驗中使用:切割蛋白條帶用以測序、質譜分析或抗體制備。

4. 建議-20保存,如果室溫放置2-3周,則可添加新的DTT,蛋白條帶會重新變得清晰和明亮。添加DTT的終濃度不要超過20 mM。也可以添加其他還原劑TCEP(2 mM), 效果也很好。

規格

每個規格包含3管:Instant-Bands, Resuspension Buffer 和Enhancing buffer。只有使用Bis-tris 膠時才需要加Enhancing Buffer.

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