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上海信帆生物科技有限公司
中級會(huì)員 | 第13年

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干擾物質(zhì)
血清及相關(guān)類產(chǎn)品
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實(shí)驗(yàn)代測服務(wù)項(xiàng)目
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RT-PCR技術(shù)服務(wù),實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),PCR實(shí)驗(yàn)代測

時(shí)間:2018-3-21閱讀:2157
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Real -Time PCR,即實(shí)時(shí)監(jiān)測PCR擴(kuò)增產(chǎn)物并進(jìn)行解析的方法,它是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光物質(zhì),并通過Real -Time PCR檢測系統(tǒng)對PCR反應(yīng)進(jìn)程中的熒光信號強(qiáng)度進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測,zui終對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理的方法。Real -Time PCR自1996年由美國Applied Biosystems公司推出以來,廣泛應(yīng)用于生物研究的各個(gè)領(lǐng)域。目前主要有SYBR Green 染料、Taqman探針法兩種。

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PCR實(shí)驗(yàn)代測,熒光定量PCR代測服主要儀器及耗材
旋渦振蕩器 :上海青浦瀘西儀器廠產(chǎn)品
手握式電動(dòng)勻漿機(jī):德國FLUKO 公司產(chǎn)品
低溫冷凍離心機(jī):Sigma(3K15)公司產(chǎn)品
Real-time檢測儀:ABI (ABI-7300)公司產(chǎn)品
超純水分離系統(tǒng):美國LABCONCO公司
離心管及10μL、200μL、1000μL槍頭等常規(guī)耗材均為國產(chǎn);RNA提取過程中所需的離心管、槍頭等耗材經(jīng)過0.1%的DEPC水浸泡過夜,121℃滅菌30min,烘干后備用。
 
PCR實(shí)驗(yàn)代測,熒光定量PCR代測服實(shí)驗(yàn)室試劑的操作
1)所用的所有溶液都應(yīng)該沒有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。
2)所有PCR試劑中使用的水都應(yīng)該是高質(zhì)量的-新鮮蒸餾的去離子水,用0.22μm過濾的,并且是高壓滅菌。
3)在20℃到25℃貯存的試劑建議加點(diǎn)像疊氮鈉一類的抗微生物劑,在擴(kuò)增試劑或樣品制備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不抑制擴(kuò)增反應(yīng)。
4)所用試劑都應(yīng)該以大體積配制,實(shí)驗(yàn)一下看試劑是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量進(jìn)行貯存。
5)所有試劑和樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的瓶子和管子。
6)新配制的試劑在用于準(zhǔn)備新的標(biāo)本之前應(yīng)該加以檢驗(yàn)。
7)樣品準(zhǔn)備和前PCR區(qū)所使用的移液管在不使用時(shí)都應(yīng)該小心保存。

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