目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細胞>>細胞系>> BY-1401VERO-TB非洲綠猴腎細胞克隆株細胞系
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來源與篩選機制
形態與生長特征
功能特性
受體表達：TLR2 與 TLR4 表達量分別為親本細胞的 2.5 倍和 1.8 倍（qPCR 檢測），表面受體密度達 8×10?分子 / 細胞（流式細胞術），可高效識別結核分枝桿菌的脂類與肽聚糖抗原。
免疫應答：經 ESAT-6（5μg/mL）刺激 24 小時后，IL-6 分泌量達 800pg/mL，TNF-α 達 500pg/mL，分別為親本細胞的 3 倍和 2.5 倍，且應答閾值低（最di檢測限 0.1μg/mL ESAT-6），優于傳統巨噬細胞模型（最di檢測限 1μg/mL）。
生物安全性：無致瘤性（裸鼠接種實驗陰性），外源微生物檢測均為陰性，適合作為診斷試劑生產的細胞基質。
結核診斷試劑研發
抗原檢測平臺：利用其對結核抗原的高敏感性，構建夾心 ELISA 檢測體系。例如，以 VERO-TB 細胞裂解液包被微孔板，可捕獲樣本中低至 10pg/mL 的 ESAT-6，較傳統 Vero 細胞檢測靈敏度提升 10 倍，對肺結核患者痰液樣本的檢出率達 92%，特異性＞95%，顯著優于商用試劑盒（檢出率 85%）。
γ- 干擾素釋放實驗（IGRA）優化：作為抗原呈遞細胞，可高效激活結核特異性 T 細胞分泌 IFN-γ。將 VERO-TB 負載 PPD 抗原后與外周血單個核細胞共培養，IFN-γ 檢測靈敏度提升 40%，對潛伏性結核感染的檢出率達 88%，較傳統方法減少假陰性結果。
抗結核藥物篩選與機制研究
藥物活性評估：可用于篩選具有免疫調節作用的抗結核藥物。例如，檢測中藥提取物對 ESAT-6 誘導的 IL-6 分泌的抑制效果，發現天然活性成分的半數抑制濃度為 20μM，且對細胞無毒性（半數毒性濃度＞200μM），后續動物實驗證實其可降低結核小鼠的肺部炎癥水平，為開發宿主導向治療藥物提供候選分子。
耐藥機制研究：通過構建耐藥結核分枝桿菌感染模型，發現 VERO-TB 細胞對耐藥株的識別能力下降（細胞因子分泌減少 50%），與耐藥株細胞壁脂阿拉伯甘露聚糖結構改變相關，為解析耐藥菌的免疫逃逸機制提供新線索。
結核疫苗免疫原性評估
候選疫苗篩選：可評估疫苗誘導的抗原特異性免疫應答。例如，對重組 BCG 疫苗免疫的小鼠血清，通過 VERO-TB 細胞檢測其阻斷 ESAT-6 結合的能力，中和率達 70% 的疫苗株在動物實驗中顯示出更強的保護力（肺部菌落數減少 100 倍），為疫苗優化提供快速評價工具。
黏膜免疫研究：將 VERO-TB 細胞與支氣管上皮細胞共培養構建 3D 模型，可模擬結核桿菌肺部感染微環境，評估疫苗誘導的黏膜抗體（如 IgA）的保護效果，發現分泌型 IgA 可降低結核桿菌的細胞黏附率 60%，為黏膜疫苗設計提供依據。
基礎培養方案
培養基：DMEM 高糖培養基添加 10% 胎牛血清，pH 維持在 7.2-7.4，可加入抗感染試劑預防污染。
傳代流程：當細胞融合度達 70%-80% 時，棄舊培養基，PBS 洗滌 2 次，加入細胞解離液，37℃孵育 3-4 分鐘至細胞脫落，含血清培養基終止消化后按 1:4 比例傳代，避免消化過度影響細胞活性。
凍存保護：取對數生長期細胞，用含 10% DMSO 的wan全培養基重懸至密度 1×10?個 /mL，程序降溫后液氮保存，復蘇時 37℃水浴解凍，離心去除 DMSO，傳代 2 次待細胞狀態穩定后使用。
抗原刺激與檢測操作
結核抗原處理：將 ESAT-6 或 PPD 抗原用無血清培養基稀釋至 0.1-10μg/mL，加入鋪滿 VERO-TB 細胞的 96 孔板（1×10?細胞 / 孔），37℃孵育 24 小時，收集上清檢測細胞因子。
細胞因子檢測：采用 ELISA 試劑盒檢測 IL-6、TNF-α 等，或通過流式細胞術分析細胞表面 CD80/CD86 的表達變化，評估抗原刺激強度。
優勢：
抗原敏感性高：對結核分枝桿菌抗原的檢測閾值顯著低于親本細胞與傳統免疫細胞模型，適合低濃度抗原樣本的檢測。
培養穩定性好：貼壁生長特性穩定，傳代操作簡便，可實現標準化培養，批間實驗差異＜8%。
功能多樣性：既可作為檢測平臺，又能用于藥物篩選與疫苗評估，覆蓋結核研究多個領域。
局限性：
非人源模型限制：作為猴源細胞，其免疫受體與人類存在物種差異（TLR2 同源性 90%），部分研究結果需在人源細胞中驗證。
單一克隆特性：對非結核分枝桿菌（如鳥分枝桿菌）的敏感性較低，應用范圍受限。
血清依賴：無血清培養基中 TLR 表達量下降 20%，影響抗原應答效率，增加大規模培養成本。
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