來源與構(gòu)建：該細(xì)胞系以 CHO-K1 細(xì)胞為親本，通過慢病毒載體介導(dǎo)將人 5-HT1B 受體基因?qū)爰?xì)胞基因組，經(jīng)嘌呤霉素抗性篩選及單克隆純化獲得穩(wěn)定株，“5-HT1B" 明確標(biāo)識(shí)其表達(dá)的靶受體，與普通 CHO 細(xì)胞形成功能區(qū)分。構(gòu)建過程中采用 EF1α 啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)表達(dá)，結(jié)合信號(hào)肽優(yōu)化序列，顯著提升受體膜定位效率，確保 90% 以上的 5-HT1B 受體定位于細(xì)胞膜表面。

形態(tài)與增殖：體外培養(yǎng)呈典型上皮樣形態(tài)，貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞呈多邊形，排列規(guī)則，邊界清晰，核質(zhì)比正常。在 37℃、5% CO?條件下，增殖穩(wěn)定，傳代周期約 24-30 小時(shí)，可適應(yīng)含 10% 胎牛血清的 F12K 培養(yǎng)基，無需特殊營(yíng)養(yǎng)因子，傳代 50 次以上仍能維持 5-HT1B 受體高表達(dá)（表達(dá)量為親本細(xì)胞的 30-50 倍），受體活性無明顯衰減。

表達(dá)特征：5-HT1B 受體為 G 蛋白偶聯(lián)受體（GPCR），膜表達(dá)量達(dá)（2.0-2.5）×10?分子 / 細(xì)胞（流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)），對(duì) 5-HT 的親和力高（解離常數(shù) Kd≈3×10?? M），激活后可有效抑制腺苷酸環(huán)化酶活性，降低胞內(nèi) cAMP 水平（5-HT 刺激后 cAMP 濃度下降 60%-70%），并激活 MAPK/ERK 通路，功能活性接近人腦組織來源的天然受體。

優(yōu)勢(shì)：5-HT1B 受體表達(dá)穩(wěn)定，長(zhǎng)期傳代后功能活性波動(dòng)＜10%，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性優(yōu)于原代神經(jīng)細(xì)胞；遺傳背景清晰，與 CHO-K1 細(xì)胞同源性高，便于通過親本對(duì)照排除非特異性效應(yīng)；僅表達(dá) 5-HT1B 單一受體亞型，無內(nèi)源性 5-HT 受體干擾，實(shí)驗(yàn)結(jié)果特異性強(qiáng)；培養(yǎng)條件簡(jiǎn)單，可實(shí)現(xiàn)大規(guī)模擴(kuò)增，適合高通量藥物篩選。

局限性：作為非神經(jīng)來源細(xì)胞，缺乏神經(jīng)元te有的胞內(nèi)環(huán)境，可能影響部分受體調(diào)控機(jī)制（如與神經(jīng)元特異性蛋白的相互作用）；受體信號(hào)通路的物種差異（倉(cāng)鼠 vs 人類）可能導(dǎo)致部分藥物的活性評(píng)估存在偏差，需結(jié)合人源神經(jīng)細(xì)胞驗(yàn)證；高表達(dá)受體可能導(dǎo)致配體敏感性過高，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格控制藥物濃度。

培養(yǎng)條件：常規(guī)使用含 10% 胎牛血清的 F12K 培養(yǎng)基，添加 2μg/mL 嘌呤霉素維持抗性篩選，37℃、5% CO?培養(yǎng)箱中生長(zhǎng)良好。傳代時(shí)控制融合度在 70%-80%，采用溫和消化方法分離細(xì)胞，避免機(jī)械損傷影響受體膜定位。進(jìn)行功能實(shí)驗(yàn)前，建議用無血清培養(yǎng)基饑餓處理 16-24 小時(shí)，減少血清成分對(duì) GPCR 信號(hào)的干擾。

質(zhì)控與安全：定期通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)受體膜表達(dá)量，放射性配體結(jié)合實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證親和力，確保受體功能穩(wěn)定；STR 鑒定排除交叉污染，支原體檢測(cè)陰性。凍存使用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基，液氮保存可維持活性 5 年以上，復(fù)蘇后傳代 2 次即可用于實(shí)驗(yàn)。