Hybrid Liver cell GLH03鼠/人雜交瘤細(xì)胞系
Hybrid Liver cell GLH03鼠/人雜交瘤細(xì)胞系是肝相關(guān)單克隆抗體制備與肝臟疾病研究領(lǐng)域的特色細(xì)胞模型，憑借跨物種融合的du特優(yōu)勢(shì)、穩(wěn)定分泌肝靶向特異性抗體及良好的肝組織抗原識(shí)別能力，在肝臟疾病診斷試劑研發(fā)、肝特異性抗原檢測(cè)及肝免疫學(xué)研究中應(yīng)用廣泛，為肝相關(guān)單克隆抗體的獲取與功能探索提供了優(yōu)質(zhì)載體。
來源與背景：該細(xì)胞系源于 SD 大鼠肝臟相關(guān) B 淋巴細(xì)胞與人類骨髓瘤細(xì)胞的融合產(chǎn)物，通過改良型雜交瘤技術(shù)篩選克隆獲得。其建立過程是將經(jīng)肝特異性抗原免疫后的大鼠 B 淋巴細(xì)胞與永生化人骨髓瘤細(xì)胞融合，利用 HAT 培養(yǎng)基結(jié)合物種特異性標(biāo)志物篩選出成功融合的雜交瘤細(xì)胞，再經(jīng)有限稀釋法克隆和抗體肝靶向性檢測(cè)，最終得到能穩(wěn)定分泌針對(duì)肝靶抗原的單克隆抗體的細(xì)胞株。這一跨物種融合過程既保留了嚙齒類動(dòng)物對(duì)異種抗原的強(qiáng)免疫應(yīng)答能力，又融入了人類細(xì)胞的部分生物學(xué)特性，有效解決了單一物種雜交瘤在肝抗原識(shí)別廣度與臨床相關(guān)性上的局限，為獲取兼具高特異性與臨床參考價(jià)值的肝相關(guān)抗體提供了創(chuàng)新來源，自建立以來，在多種肝臟疾病免疫檢測(cè)體系的構(gòu)建中發(fā)揮了關(guān)鍵作用。
細(xì)胞特性：形態(tài)上呈現(xiàn)du特的跨物種雜交瘤特征，貼壁生長時(shí)呈混合樣形態(tài)，兼具上皮樣與成纖維樣特點(diǎn)，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見較多肝相關(guān)酶系顆粒，細(xì)胞核呈不規(guī)則橢圓形，核質(zhì)比約 1:2.3，約 8% 的細(xì)胞可見多核結(jié)構(gòu)，體現(xiàn)鼠 / 人融合細(xì)胞的形態(tài)特殊性。核心特性顯著：抗體分泌穩(wěn)定高效，分泌量達(dá) 8-14μg/10?細(xì)胞 / 24h，連續(xù)傳代 55 次后，抗體分泌能力僅下降 7%，穩(wěn)定性在跨物種雜交瘤中表現(xiàn)突出；肝抗原結(jié)合特異性高，與肝靶抗原的結(jié)合常數(shù)（Kd）達(dá) 10??M 級(jí)別，與非肝組織抗原的交叉反應(yīng)率低于 0.6%，確保了肝組織檢測(cè)的靶向性；增殖能力穩(wěn)健，體外培養(yǎng)倍增時(shí)間約 52-58 小時(shí)，克隆形成率 39%，腹腔接種 SCID 小鼠后，14-20 天可形成腹水，腹水中抗體濃度達(dá) 3-7mg/ml，便于批量制備抗體。傳代時(shí)需采用溫和處理方法，傳代比例 1:2-1:3，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到 65%-70% 時(shí)需及時(shí)傳代，過度密集會(huì)導(dǎo)致抗體分泌量下降 17% 左右。
培養(yǎng)條件：適宜采用含 12% 胎牛血清的 DMEM/F12 混合培養(yǎng)基，添加 1% 雙抗及 0.5% 肝組織提取液，培養(yǎng)環(huán)境控制在 37℃、5% CO?與 3% O?的微低氧環(huán)境。關(guān)鍵培養(yǎng)要點(diǎn)：混合培養(yǎng)基適配性關(guān)鍵，DMEM 與 F12 以 3:1 比例混合可使細(xì)胞活力提升 15%，添加的肝組織提取液能維持抗體的肝靶向性；血清質(zhì)量嚴(yán)格，需使用超低內(nèi)毒素胎牛血清（<0.2EU/ml），劣質(zhì)血清會(huì)使細(xì)胞跨物種特性丟失 25%，抗體分泌量減少 32%；無血清培養(yǎng)需特殊配方，在無血清培養(yǎng)基中需添加肝特異性生長因子復(fù)合物，可維持細(xì)胞正常生長，且抗體的人源化修飾兼容性提高，有利于后續(xù)的臨床轉(zhuǎn)化；腹水制備規(guī)范，SCID 小鼠腹腔預(yù)先注射弗氏不wan全佐劑，10 天后接種 1.5×10?個(gè)細(xì)胞，16-22 天收集腹水，每只小鼠可收獲 2-5ml 腹水，腹水經(jīng)純化后仍保持對(duì)人肝組織的高親和力。凍存采用含 15% DMSO 與 5% 人血清白蛋白的凍存液，程序降溫后液氮保存，復(fù)蘇后 72 小時(shí)貼壁率達(dá) 76%，抗體分泌功能恢復(fù) 82% 以上。
檢測(cè)鑒定：經(jīng)嚴(yán)格的微生物與物種交叉污染檢測(cè)，無細(xì)菌、真菌、支原體及反轉(zhuǎn)錄病毒污染，符合跨物種雜交瘤細(xì)胞的特殊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。抗體亞型鑒定為大鼠 IgG2b 型，輕鏈含人源化修飾特征；通過 ELISA、免疫組化等方法驗(yàn)證，該抗體能特異性結(jié)合人肝組織靶抗原，與肝外組織交叉反應(yīng)率低于 0.5%；染色體核型分析顯示，其染色體數(shù)目為 105-115 條，融合了大鼠（約 40%）與人類（約 60%）的染色體特征，存在du特的物種特異性染色體易位現(xiàn)象；功能驗(yàn)證中，將該抗體用于人肝組織切片免疫染色時(shí)，能精準(zhǔn)定位肝靶抗原，陽性信號(hào)集中于特定肝小葉區(qū)域，背景干擾極低，證實(shí)其在肝組織檢測(cè)中的精準(zhǔn)性。
應(yīng)用領(lǐng)域：在肝疾病分子檢測(cè)方面，基于該細(xì)胞系分泌的抗體構(gòu)建的 ELISA 試劑盒，對(duì)肝靶抗原的檢測(cè)靈敏度達(dá) 0.38ng/ml，尤其適用于肝纖維化、肝癌等疾病的血清標(biāo)志物定量分析；在肝臟疾病診斷試劑研發(fā)中，利用該抗體開發(fā)的免疫熒光探針，可用于肝穿刺組織切片的特異性染色，對(duì)早期肝損傷的診斷符合率達(dá) 92%。在肝免疫學(xué)研究中，可用于肝抗原表位圖譜繪制，通過人肝組織芯片篩選確定抗體識(shí)別的關(guān)鍵功能區(qū)域，為肝靶向藥物設(shè)計(jì)提供重要靶點(diǎn)信息。此外，該細(xì)胞系因含人源細(xì)胞成分，在抗體人源化改造研究中具有天然優(yōu)勢(shì)，通過基因編輯技術(shù)可使抗體的人源化程度提升至 85% 以上，顯著降低臨床應(yīng)用中的免疫排斥風(fēng)險(xiǎn)，為肝相關(guān)單克隆抗體藥物的研發(fā)提供了高效平臺(tái)，有力推動(dòng)了肝臟疾病精準(zhǔn)診斷與靶向治療技術(shù)的發(fā)展。
以上信息僅供參考，詳細(xì)信息請(qǐng)聯(lián)系我們。
會(huì)員.png)
13
化工儀器網(wǎng)