A-9小鼠皮下結(jié)締組織細胞系
A-9小鼠皮下結(jié)締組織細胞系源于 C3H 小鼠皮下疏松結(jié)締組織，是經(jīng)化學誘變得到的胸苷激酶（TK）缺陷型成纖維細胞模型，在基因互補、輻射敏感性及嘧啶代謝研究中地位關(guān)鍵，其代謝缺陷使其成為 HAT 選擇系統(tǒng)的經(jīng)典工具，為細胞遺傳學研究提供可靠支撐。
該細胞呈典型成纖維細胞形態(tài)，長梭形或星形，貼壁生長呈放射狀排列，長徑 25-40μm，核橢圓形含 1-2 個核仁，核分裂象較少。電鏡下胞質(zhì)富粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和微絲束，與野生型無顯著差異。免疫表型上，vimentin 和 fibronectin 陽性率超 95%，不表達上皮和內(nèi)皮標志物，流式檢測為 40 條染色體正常核型，1 號染色體長臂有微小缺失，與 TK 基因定位區(qū)一致。
體外培養(yǎng)核心是 TK 缺陷導(dǎo)致的代謝特性。最適為含 10% 胎牛血清的 MEM 培養(yǎng)基（加非必需氨基酸），37℃、5% CO?環(huán)境下，傳代周期 72 小時，倍增時間 50 小時。因無法利用外源性胸苷合成 DNA，在 HAT 培養(yǎng)基中 48 小時全死亡，普通培養(yǎng)基生長良好，導(dǎo)入 TK 基因的陽性細胞可在 HAT 中存活，篩選效率 10??。在含 BrdU 培養(yǎng)基中存活率 85%，遠高于野生型的 10%，能規(guī)避嘧啶類似物毒性。
培養(yǎng)操作需注意貼壁依賴和代謝特點。傳代用 0.25%yi酶 - EDTA 消化 2-3 分鐘，傳代比例 1:3，凍存用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基，復(fù)蘇存活率超 90%。培養(yǎng)基需充足谷an酰胺（2mM）和葡萄糖（4.5g/L），pH 維持 7.2-7.4，酸性環(huán)境會抑制增殖。
輻射敏感性上，對 X 射線和 γ 射線敏感度遠超野生型，LD50 為 2Gy（野生型 4Gy），輻射后 DNA 損傷修復(fù)慢，G2/M 期阻滯率 60%，p53 表達增 5 倍，凋亡率 35%，是輻射防護劑和增敏劑篩選的理想模型。
基因互補實驗中，它是驗證 TK 基因功能的標準工具。導(dǎo)入小鼠 TK cDNA 后，陽性克隆在 HAT 中存活，TK 酶活性恢復(fù)至野生型 80%，嘧啶代謝正常，1?C - 胸苷摻入量從 0.1% 升至 90%。實驗顯示 SV40 啟動子驅(qū)動 TK 表達效率是 β- 肌動蛋白啟動子的 3 倍，基因表達背景穩(wěn)定，重復(fù)性好。
嘧啶代謝研究中，其 DNA 合成的 dTTP 全靠從頭合成，被氨基蝶呤阻斷后 dTTP 耗盡致 DNA 復(fù)制停止。尿苷攝取速率是野生型 1.5 倍，谷an酰胺消耗增 20%，可作為胸苷酸合酶抑制劑研究模型，對氟尿*啶的 IC50 0.5μM，遠低于野生型的 5μM。
生物制藥中，可生產(chǎn)重組蛋白，轉(zhuǎn)染人白細胞介素 - 2 基因后分泌量達 300IU/mL?24h，HAT 篩選獲穩(wěn)定表達株比例 5%，適合微載體培養(yǎng)，反應(yīng)器中細胞密度達 8×10?細胞 /mL。
輻射遺傳學上，染色體畸變率與輻射劑量線性相關(guān)（r=0.98），可作輻射劑量生物標志物，與物理劑量計偏差＜10%，體外培養(yǎng)簡便，能長期保存用于回顧性劑量重建。
細胞毒性測試中，可評估嘧啶類似物特異性毒性，新型胸苷酸合酶抑制劑對其 IC50 0.3μM，對 TK 陽性細胞 3μM，靶向性好，能減少藥物篩選假陽性。
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