LⅡ小鼠網織細胞肉瘤瘤株細胞系
LⅡ小鼠網織細胞肉瘤瘤株細胞系源自 615 近交系小鼠的自發性網織細胞肉瘤，是保留網織細胞惡性轉化特征和淋巴造血組織浸潤能力的惡性腫瘤模型，在網織細胞肉瘤的發病機制、免疫逃逸及抗腫瘤藥物篩選研究中具有重要價值，為解析這種淋巴造血系統惡性腫瘤的生物學行為提供了理想工具。
該細胞系呈現典型的網織細胞肉瘤細胞形態與表型特征。顯微鏡下，細胞呈圓形或不規則形，以懸浮生長為主，部分細胞呈松散聚集狀態，細胞體積較大（直徑 15-25μm），核質比ji高，細胞核呈圓形或腎形，染色質呈疏松網狀，可見 1-3 個明顯核仁，核分裂象極為活躍（每 10 個高倍視野 15-20 個），胞質豐富，呈嗜堿性，可見偽足樣突起，電鏡下可見胞質內含有豐富的核糖體和少量粗面內質網，細胞表面有較多微絨毛，符合網織細胞的超微結構特點。免疫表型分析顯示，細胞高表達網織細胞相關標志物 CD11b 和 Mac-1，流式細胞術檢測陽性率分別達 90% 和 85%，同時表達單核巨噬細胞相關抗原 F4/80，陽性率達 75%，而 T、B 淋巴細胞標志物 CD3、CD19 呈陰性，證實其網織細胞來源特性。
體外培養體系中，LⅡ 細胞展現出旺盛的增殖能力與強侵襲潛能。最適培養條件為含 15% 胎牛血清的 RPMI 1640 培養基，添加 2mM 谷an酰胺，在 37℃、5% CO?環境下，傳代周期約 48 小時，對數生長期細胞活力達 95% 以上，倍增時間約 24 小時，顯著快于正常網織細胞。其顯著特點是體外侵襲能力ji強，Transwell 侵襲實驗中 24 小時穿透基質膠的細胞數是正常網織細胞的 8 倍，這種侵襲能力與其高表達基質金屬蛋白酶 - 12（MMP-12）密切相關，酶譜分析顯示其活性較正常網織細胞高 6 倍，可高效降解淋巴組織的基質成分。軟瓊脂克隆形成率達 40%，克隆形態呈圓形或不規則形，邊緣模糊，反映其高度惡性的克隆形成能力。凍存復蘇性能優異，液氮凍存后復蘇存活率超 90%，連續傳代 50 次后，CD11b 表達及侵襲能力無明顯衰減，保證實驗的穩定性與可重復性。
LⅡ 細胞的核心價值體現在其對網織細胞肉瘤浸潤淋巴造血組織過程的精準模擬。在動物模型中，將 1×10?個細胞尾靜脈注射 615 小鼠，7 天即可在脾臟和淋巴結中檢測到腫瘤細胞，14 天脾臟和淋巴結明顯腫大（重量分別增加 4 倍和 3 倍），21 天骨髓浸潤率達 100%，病理切片顯示脾臟紅髓和白髓結構被腫瘤細胞破壞，淋巴結濾泡消失，骨髓造血組織被大量腫瘤細胞取代，與人類網織細胞肉瘤的淋巴造血組織浸潤模式高度一致。通過熒光標記追蹤發現，腫瘤細胞首先定植于脾臟紅髓血竇和淋巴結邊緣竇，通過高表達 L - 選擇素與淋巴組織血管內皮細胞結合，進而浸潤淋巴實質，這種浸潤路徑依賴 CCR5-CCL5 趨化軸，CCR5 拮抗劑處理可使脾臟和淋巴結浸潤率下降 60%。
在發病機制研究中，該細胞系揭示了網織細胞肉瘤te有的分子異常。基因測序顯示，細胞存在 NRAS 基因第 61 密碼子突變，導致 RAS/RAF/MEK 通路持續激活，Western blot 檢測顯示磷酸化 MEK（p-MEK）和磷酸化 ERK（p-ERK）表達量較正常網織細胞高 8 倍和 10 倍，使用 MEK 抑制劑處理后，細胞增殖率下降 65%，凋亡率上升 40%，證實 NRAS 突變是其惡性增殖的重要驅動因素。此外，細胞中 NF-κB 信號通路異常激活，p65 亞基核轉位增加，可結合至 IL-6 啟動子區域，促進細胞因子分泌，NF-κB 抑制劑處理可使細胞 G1 期比例增加 35%。
在轉移機制研究中，LⅡ 細胞展現出廣泛的淋巴造血組織轉移特性。動物實驗顯示，除脾臟、淋巴結和骨髓外，肝臟和肺臟也可出現轉移灶，30 天肝轉移率達 50%，肺轉移率達 35%，這種多器官轉移特性與細胞高表達黏附分子 CD44v6 相關，該分子可與多種組織中的透明質酸結合，流式細胞術檢測顯示其與肝竇內皮細胞的黏附率達 45%，CD44v6 抗體處理可使肝轉移率下降 55%。體外遷移實驗顯示，細胞對不同組織來源的趨化因子均有較強反應，遷移能力是其他肉瘤細胞系的 2 倍，這種廣泛遷移能力與其高表達多種趨化因子受體相關。
在藥物篩選應用中，LⅡ 細胞是評估網織細胞肉瘤治療藥物的有效工具。體外藥敏實驗顯示，細胞對蒽環類藥物敏感，阿mei素的 IC50 約 0.2μM，藥物處理后細胞周期停滯于 G2/M 期，凋亡相關蛋白 Caspase-3 活性上調 5 倍。聯合用藥實驗證實，阿mei素與 MEK 抑制劑聯用可使殺傷率提升至 85%，較單藥治療提高 35%，且對正常網織細胞毒性更低（IC50 提高 2.5 倍）。體內實驗中，阿mei素腹腔注射可使 615 小鼠脾臟重量減少 60%，外周血腫瘤細胞比例從 60% 降至 20%，證實其體內抗網織細胞肉瘤活性。
在免疫逃逸機制研究中，LⅡ 細胞通過多種方式逃避宿主免疫攻擊。細胞表面高表達 PD-L1，較正常網織細胞高 5 倍，可與 T 細胞表面 PD-1 結合抑制免疫應答，PD-L1 抗體處理可使腫瘤細胞對細胞毒性 T 細胞的敏感性提高 40%。同時，細胞分泌大量 IL-10，可誘導調節性 T 細胞（Treg）分化，使腫瘤微環境中 Treg 比例增加 3 倍，IL-10 中和抗體可增強免疫細胞對腫瘤細胞的殺傷活性。
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