來源與形態(tài)：該細胞系源自中國倉鼠卵巢細胞（CHO），通過化學誘變篩選獲得 dhFr 基因缺陷株。體外培養(yǎng)時呈上皮樣形態(tài)，貼壁生長，細胞呈多邊形或短梭形，排列均勻，邊緣清晰。在 37℃、5% CO?的培養(yǎng)環(huán)境中，增殖穩(wěn)定，傳代周期約 2-3 天，可適應貼壁培養(yǎng)或懸浮培養(yǎng)，尤其適合無血清培養(yǎng)基體系。

遺傳特征：保留 CHO 細胞的非整倍體核型（染色體數(shù)目約 20-22 條），核心特征是 dhFr 基因功能缺失 ——dhFr 是相關代謝關鍵酶，缺失后細胞無法自主合成胸苷和嘌呤，必須依賴培養(yǎng)基中的外源性次黃piao呤和胸苷才能存活（即 HT 營養(yǎng)缺陷型）。這一特性使其成為基因擴增的理想工具：當外源基因與 dhFr 基因共轉(zhuǎn)染后，在特定抗代謝藥物壓力下，dhFr 基因會與外源基因共同擴增，從而顯著提高目標蛋白的表達量。

優(yōu)勢：具有強大的基因擴增能力，可顯著提高外源蛋白表達量；能對蛋白進行正確的翻譯后修飾，產(chǎn)物活性接近天然蛋白；培養(yǎng)適應性強，可通過懸浮培養(yǎng)規(guī)模化生產(chǎn)，滿足工業(yè)級需求；且無內(nèi)源性病毒污染，生物安全性高，被 FDA 等監(jiān)管機構(gòu)廣泛認可。

局限性：基因擴增過程耗時較長（需數(shù)月階梯式篩選），且特定抗代謝藥物壓力可能導致細胞基因組不穩(wěn)定；部分復雜蛋白的表達仍受限于細胞自身的修飾能力（如某些特殊糖型無法合成）；培養(yǎng)成本較高，需嚴格控制特定抗代謝藥物濃度與培養(yǎng)基成分。

培養(yǎng)條件：基礎培養(yǎng)基需添加次黃piao呤和胸苷（HT 補充劑）以滿足營養(yǎng)需求；若用于基因擴增，需在培養(yǎng)基中加入特定抗代謝藥物（濃度從 0.01μM 逐步提升至 1μM 以上）。生產(chǎn)階段可改用化學成分明確的無血清培養(yǎng)基，減少外源污染物，便于下游純化。

污染防控：貼壁細胞易受支原體污染，需定期通過 PCR 檢測；凍存時使用含 10% DMSO 的凍存液，液氮保存可長期維持活性，復蘇時快速解凍并離心去除 DMSO，避免細胞損傷。