目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細胞>>細胞系>> BY-1383FRhK4恒河猴胚腎細胞系
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來源與分化特征:該細胞系源自 20 世紀 60 年代恒河猴胚胎腎組織,經(jīng)原代培養(yǎng)自然永生化獲得(“FRhK" 代表恒河猴胚腎,“4" 為克隆編號)。未引入外源轉(zhuǎn)化基因,全基因組測序顯示染色體數(shù)目為 42(恒河猴正常核型),與原代胚腎細胞遺傳相似度>97%,核型穩(wěn)定性在傳代 100 次內(nèi)畸變率<3%,胚胎期標(biāo)志物 WT1 表達陽性率達 85%(免疫組化檢測)。
形態(tài)與增殖:體外培養(yǎng)呈上皮樣,貼壁生長為多邊形,胞質(zhì)豐富,排列疏松;懸浮培養(yǎng)可短期存活(72 小時內(nèi)),以貼壁培養(yǎng)為主。37℃、5% CO?條件下,增殖周期 24-28 小時,較成年猴腎細胞短 15%-20%,適應(yīng)含 10% 胎牛血清的 MEM 培養(yǎng)基,傳代 80 次以上生長速率衰減<12%,凍存復(fù)蘇存活率超 88%,無血清馴化后細胞密度可達 5×10?個 /cm2。
功能特征:核心優(yōu)勢是病毒受體廣譜表達:脊髓灰質(zhì)炎病毒受體(PVR)與登革病毒受體(DC-SIGN)共表達陽性率>90%(流式檢測)。對脊髓灰質(zhì)炎病毒 Ⅰ 型感染效率達 95%,48 小時病毒滴度 10?-10? PFU/mL;感染登革病毒 2 型 72 小時后,細胞圓縮、網(wǎng)格狀脫落(典型 CPE),病毒滴度 10? TCID??/mL,顯著高于 Vero 細胞(高 1-2 個數(shù)量級)。
病毒分離鑒定
疫苗研發(fā)生產(chǎn)
藥物篩選研究
貼壁培養(yǎng):
復(fù)蘇:37℃水浴解凍,轉(zhuǎn)移至含 10mL 預(yù)熱 MEM(10% 胎牛血清)離心管,1000rpm 離心 5 分鐘,接種 T75 瓶,24 小時貼壁率超 90%。
換液:48 小時首ci換液,此后每 2 天一次,維持密度 2×10?-8×10?個 /cm2(過高降低病毒敏感性)。
傳代:融合度 75% 時,PBS 清洗后加 2mL 解離液,37℃孵育 1.5 分鐘,終止后按 1:6 傳代,避免過度融合丟失胚胎特性。
病毒培養(yǎng):
接種:1×10?個 / 孔接種 24 孔板,24 小時至融合度 60%-70%,無血清培養(yǎng)基洗滌 2 次。
感染:加 100μL 稀釋病毒液,37℃吸附 1 小時(每 15 分鐘輕搖),換含 2% 血清維持液。
收獲:脊髓灰質(zhì)炎病毒 48 小時、登革病毒 72 小時觀察 CPE,80% 病變時收獲上清,-80℃凍存,通過空斑法或 RT-PCR 測滴度。
凍存:對數(shù)期細胞離心后,用 70% MEM+20% 胎牛血清 + 10% DMSO 重懸至 6×10?個 /mL,程序降溫后液氮保存,有效期超 5 年,復(fù)蘇傳代 2 次后用于實驗。
優(yōu)勢:對脊髓灰質(zhì)炎、登革病毒敏感性高(滴度超普通猴腎細胞 1-2 個數(shù)量級);胚胎細胞特性支持高效復(fù)制;遺傳穩(wěn)定(CV<7%);符合 WHO 標(biāo)準,安全性經(jīng)長期驗證;可支持多類病毒復(fù)制,適用于廣譜研究。
局限性:對冠狀病毒等敏感性低;傳代>100 次胚胎標(biāo)志物可能下調(diào)(約 15%);貼壁依賴強,懸浮培養(yǎng)難度高于 CHO 細胞;部分批次可能含內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒(需 PCR 篩選)。
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