目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細胞>>細胞系>> BY-1420IBRS-2豬腎傳代細胞系
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來源與建立背景
形態與生長特征
功能特性
上皮標志物與受體表達:高表達腎臟上皮特異性標志物細胞角蛋白 19(CK19,陽性率 96%),同時表達豬水皰病病毒受體清道夫受體 B2(SR-B2,陽性率 92%)、豬瘟病毒受體 CD46(陽性率 88%),其受體表達譜對 RNA 病毒的覆蓋度達 85%,顯著高于 PK (15) 細胞系;與原代豬腎細胞相比,病毒受體表達量提升 1.8 倍,為病毒高效感染提供分子基礎。
病毒敏感性譜:對豬水皰病病毒、豬瘟病毒等 RNA 病毒的感染效率達 98%,豬水皰病病毒感染后 24 小時出現典型細胞病變(細胞圓縮、融合),病毒滴度達 10?.? TCID??/mL(是 PK (15) 細胞系的 3 倍);對部分 DNA 病毒(如豬圓環病毒)也有一定支持能力,但效率低于 RNA 病毒,體現病毒類型偏好性。
代謝適應性:具有較強的營養代謝能力,在含 5% 血清的培養基中仍可正常生長,乳酸代謝速率是 PK (15) 細胞的 1.5 倍,適合低成本大規模培養;同時能快速適應無血清環境,為疫苗工業化生產提供便利。
豬源 RNA 病毒研究與疫苗開發
病毒分離與鑒定:作為豬水皰病病毒分離的 “金標準" 細胞系,IBRS-2 可從豬水皰液、糞便等樣本中高效分離病毒,分離率達 92%(PK (15) 細胞系僅 65%),且能通過細胞病變形態快速識別,為疫病快速診斷提供依據。我國首ci分離豬水皰病病毒即依賴該細胞系。
疫苗生產與效力評價:在豬瘟病毒滅活疫苗生產中,IBRS-2 細胞的病毒產量達 10? PFU/mL,較原代豬腎細胞提升 15 倍,疫苗免疫仔豬后中和抗體效價達 1:128,保護率超 90%,國內多數豬瘟疫苗生產企業采用該細胞系降低生產成本。
診斷試劑開發與抗病du藥物篩選
診斷試劑生產:利用其高效表達病毒抗原的特性,制備豬水皰病病毒 ELISA 檢測試劑盒,靈敏度達 93%,特異性 96%,較 PK (15) 細胞系生產的試劑檢測速度提升 20%,被廣泛用于基層獸醫站的疫病監測。
藥物篩選模型:基于其對 RNA 病毒的偏好性,建立針對性高通量篩選體系,日均可檢測 150 種化合物。通過該模型發現的新型蛋白酶抑制劑可抑制豬傳染性胃腸炎病毒的復制,使病毒滴度下降 1000 倍,且對細胞毒性低(CC??/EC??>50),為靶向治療提供候選分子。
病毒感染機制與跨物種傳播研究
病毒嗜性解析:通過 IBRS-2 細胞研究豬水皰病病毒的感染機制,發現病毒 VP1 蛋白的特定位點是結合 SR-B2 受體的關鍵,突變后病毒感染力下降 75%,為減毒疫苗設計提供靶點。
疫病預警模型:將人源腸道上皮受體導入 IBRS-2 細胞,構建豬 - 人跨物種感染模型,評估豬源病毒對人類的潛在威脅。實驗顯示,某重組豬水皰病病毒在該模型中的復制效率是普通 IBRS-2 細胞的 2.5 倍,提示需警惕其跨物種傳播風險。
基礎培養方案
培養基:MEM 培養基添加 10% 胎牛血清、1% 非必需氨基酸,pH 維持在 7.2-7.4;為提升 RNA 病毒產量,可添加 3ng/mL 轉化生長因子 β(TGF-β),使病毒受體表達量提升 20%。大規模生產可采用無血清培養基,病毒產量與含血清體系相當。
傳代流程:當細胞融合度達 75% 時,消化處理后按 1:5 比例接種,離心速度 1000rpm,24 小時貼壁率超 95%,避免過度融合(>80% 會導致細胞極性丟失,病毒敏感性下降)。
凍存保護:采用含 10% DMSO 的wan全培養基,細胞密度 2×10?個 /mL,程序降溫至 - 80℃過夜后轉入液氮,復蘇時 37℃水浴 1 分鐘,直接接種至培養瓶,存活率可達 90%,建議每 12 代凍存一次以保持活性。
病毒培養與檢測操作
豬水皰病病毒培養優化:細胞以 1.5×10?個 / 孔接種 24 孔板,培養 24 小時后換含 2% 血清的維持液,加入病毒液(MOI=0.05),37℃吸附 1.5 小時后換液,48 小時后通過細胞病變計數或 TCID??法測定滴度,結果變異系數<6%。
多病毒鑒定方法:通過觀察細胞病變出現時間與形態差異初步區分病毒類型(豬水皰病病毒 24-36 小時出現融合性病變,豬瘟病毒 48-72 小時出現顆粒狀病變),結合間接免疫熒光試驗可進一步確認,準確率達 88%。
優勢:
RNA 病毒特異性:對豬水皰病病毒、豬瘟病毒等 RNA 病毒的支持能力居豬源細胞系首wei,病毒滴度與分離率顯著高于 PK (15) 細胞系,是豬源 RNA 病毒研究的專屬模型。
培養效率高:倍增時間短于 PK (15) 細胞,適合快速獲得大量細胞;對血清質量依賴性較低,培養成本僅為 PK (15) 細胞系的 80%,適合資源有限的基層實驗室。
基層適用性強:病毒分離操作簡便,細胞病變出現時間早且典型,無需復雜設備即可完成初步鑒定,被全球多數基層獸醫實驗室列為shou選細胞系。
局限性:
DNA 病毒支持弱:對豬細小病毒、豬圓環病毒等 DNA 病毒的培養效率低,滴度僅為 PK (15) 細胞系的 20%-30%,需與 PK (15) 細胞系配合使用以覆蓋更多病毒類型。
屏障功能有限:上皮極性弱于 PK (15) 細胞,跨上皮電阻(TEER)值僅為 150Ω?cm2,難以模擬病毒突破腎臟屏障的感染過程。
形態穩定性差:連續傳代超過 50 代后易出現成纖維樣變,需嚴格控制傳代次數以保持病毒敏感性。
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