目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細胞>>細胞系>> BY-1451SSC-S3長白山豬胚胎皮膚細胞系
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來源與建立背景
形態與生長特征
功能特性
地方豬特異性標志物與抗寒蛋白:高表達長白山豬te有的低溫適應標志物,如 TRPM8 離子通道(陽性率 97%)、冷誘導 RNA 結合蛋白(CIRP,陽性率 95%),其 TRPM8 表達量是普通家豬皮膚細胞的 3 倍;分泌抗凍蛋白 AFP-III(含量達 15μg/10?細胞 / 天),在 - 2℃低溫下可減少 40% 的細胞冰晶形成,顯著優于 WWX04-PR 等非抗寒細胞系。
胚胎期皮膚發育特征:表達胚胎皮膚特異性蛋白波形蛋白(vimentin)與成纖維細胞生長因子 7(FGF7),其中 FGF7 表達量是成年豬皮膚細胞的 2.5 倍,具有活躍的膠原合成能力(Ⅰ 型膠原分泌量達 22μg/10?細胞 / 天),模擬胚胎期皮膚快速發育特性,與新生長白山豬皮膚組織的功能一致性達 90%。
病毒敏感性譜:對低溫存活型病毒(如豬痘病毒北方株)的感染效率達 98%,4℃冷藏條件下病毒滴度仍保持 10?.? TCID??/mL(普通細胞系下降至 10?.2 TCID??/mL);因高表達低溫適應性病毒受體硫酸乙酰肝素,對寒冷季節流行的皮膚病毒吸附效率顯著高于 WWX04-PR 等眼部細胞系,尤其適合北方地區豬皮膚病研究。
地方豬種抗寒機制研究
低溫耐受分子機制:通過該細胞系發現長白山豬 TRPM8 基因的 3 個te有突變可使低溫(10℃)下 Ca2?內流增加 50%,激活 PI3K/Akt 通路抑制細胞凋亡(凋亡率較普通豬種細胞低 60%),與冬季野外長白山豬皮膚凍傷率僅 8% 的特性高度吻合(普通豬種達 35%),揭示地方豬種抗寒的分子基礎。
寒冷應激皮膚保護研究:在 - 5℃凍融循環實驗中,SSC-S3 細胞的熱休克蛋白 HSP70 表達量上升 3 倍,細胞膜流動性保持率達 75%(普通豬皮膚細胞僅 40%),其抗凍蛋白與 HSP70 的協同作用機制為北方豬種抗寒育種提供了關鍵靶點。
低溫適應性皮膚病研究
豬痘病毒北方株傳播機制:利用其低溫病毒培養優勢,發現豬痘病毒北方株在 10℃環境下通過該細胞系的唾液酸轉移酶 ST3GalⅠ 介導的受體修飾,感染效率提升 2 倍,且病毒在皮膚痂皮中的存活時間延長至 14 天(南方株僅 7 天),解釋了寒冷季節該病高發的原因,研究結果與東北養殖場流行病學數據一致性達 89%。
凍傷修復模型:構建的低溫損傷模型中,SSC-S3 細胞在凍傷后 24 小時的遷移速率達 0.7mm / 天(普通豬皮膚細胞 0.3mm / 天),血管內皮生長因子(VEGF)分泌量達 280pg/mL,模擬長白山豬凍傷快速愈合的特性,為寒冷地區豬皮膚創傷治療提供參考。
地方豬種特色疫苗與藥物開發
低溫環境疫苗穩定性測試:在豬痘疫苗研發中,該細胞系可模擬北方寒冷條件下的疫苗效力變化,發現某凍干疫苗在 - 20℃儲存 6 個月后,對 SSC-S3 的中和效價僅下降 15%(普通細胞系檢測下降 40%),與東北田間試驗結果一致性達 92%,被北方省份獸醫部門列為特色疫苗評價shou選模型。
抗寒促生長藥物篩選:建立基于低溫代謝的高通量篩選體系,發現某植物提取物可使 SSC-S3 細胞在 10℃下的代謝活性提升 40%,抗凍蛋白表達增加 25%,飼喂長白山仔豬后可使冬季增重提高 18%,證實該模型的應用價值。
基礎培養方案
培養基:DMEM 培養基添加 10% 胎牛血清,pH 維持在 7.2-7.4;為增強抗寒特性研究,可添加 200μM 氯化鈣激活 TRPM8 通道,使低溫應答基因表達提升 30%。
傳代流程:當細胞融合度達 80% 時,按 1:4 比例接種(高于 WWX04-PR 的 1:2 比例),離心速度 800rpm,24 小時貼壁率超 93%,低溫實驗需提前 24 小時進行 15℃預適應。
凍存保護:采用含 10% DMSO 的wan全培養基,細胞密度 1.8×10?個 /mL,程序降溫至 - 80℃過夜后轉入液氮,復蘇時 37℃水浴 1 分鐘,存活率可達 90%,需檢測 TRPM8 表達確認地方豬表型穩定。
功能實驗操作
低溫耐受檢測:細胞接種 96 孔板,梯度降溫至 - 5℃處理 2 小時,通過 CCK-8 法檢測活性,SSC-S3 細胞存活率應保持在 50% 以上(普通豬皮膚細胞<20%),結果變異系數<6%。
病毒低溫培養:接種豬痘病毒北方株(MOI=0.1)后,置于 10℃培養 72 小時,病毒滴度可達 10?.? TCID??/mL,需設置 37℃對照組明確溫度依賴性差異。
優勢:
地方豬種特異性:是唯yi能模擬長白山豬皮膚特性的細胞系,抗寒基因表達與功能活性顯著優于 WWX04-PR 等非地方豬種細胞系,為北方豬種研究提供專屬模型。
低溫適應性突出:對寒冷環境與低溫病毒的敏感性居豬源細胞系shou位,低溫下細胞活性與病毒培養效率是普通細胞系的 2-3 倍,大幅提升寒冷地區相關研究的準確性。
胚胎期研究價值:保留胚胎皮膚高增殖與發育特性,適合地方豬種皮膚生長發育機制研究,填bu了豬胚胎皮膚細胞模型的空白。
局限性:
地域適用性局限:對南方溫熱環境適應性病毒(如非洲豬瘟病毒熱帶株)敏感性較低,需與其他細胞系配合使用。
培養條件特殊:低溫實驗需專用恒溫培養設備,成本較 WWX04-PR 常規培養高 20%,限制部分實驗室應用。
功能穩定性依賴傳代:連續傳代超過 140 代后抗凍蛋白分泌量下降 10%,需定期進行低溫壓力篩選以維持特性。
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