目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細(xì)胞>>細(xì)胞系>> BY-1403MM-K3獼猴腎細(xì)胞系
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更新時(shí)間：2025-07-30 13:25:04瀏覽次數(shù)：247評(píng)價(jià)
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來源與建立背景
形態(tài)與生長特征
功能特性
病毒受體表達(dá)：細(xì)胞膜表面高表達(dá)多種病毒受體，如猴免疫缺陷病毒（SIV）的受體 CD4 與共受體 CCR5，人巨細(xì)胞病毒（HCMV）的受體 PDGFRα，表達(dá)量均顯著高于常用的非洲綠猴腎細(xì)胞（如 Vero），為多種病毒感染提供分子基礎(chǔ)。
病毒敏感性：對(duì)乙型腦炎病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、輪狀病毒等具有廣譜敏感性，感染效率達(dá) 85%-95%，病毒滴度可達(dá) 10?-10? TCID??/mL；尤其對(duì)靈長類特異性病毒（如 SIV、猴痘病毒）的支持能力突出，滴度較其他猴源細(xì)胞高 1-2 個(gè)數(shù)量級(jí)，是研究人畜共患病病毒的理想模型。
代謝特性：具有活躍的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)與氨基酸代謝能力，乳酸脫氫酶活性較低（＜200U/L），適合長時(shí)間病毒培養(yǎng)，可延長病毒復(fù)制平臺(tái)期至 72-96 小時(shí)。
人畜共患病毒分離與鑒定
臨床樣本檢測：可用于從疑似感染樣本中分離病毒，如乙型腦炎患者腦脊液樣本接種后，48 小時(shí)即可觀察到典型細(xì)胞病變（胞質(zhì)內(nèi)顆粒增多、細(xì)胞融合），分離效率達(dá) 90%，較傳統(tǒng)細(xì)胞系縮短 12-24 小時(shí)，為疫情快速診斷提供技術(shù)支持。
病毒分型研究：通過觀察不同病毒株在 MM-K3 細(xì)胞中的增殖差異，可區(qū)分病毒亞型。例如，脊髓灰質(zhì)炎病毒 Ⅰ 型在該細(xì)胞中滴度比 Ⅱ 型高 10 倍，且蝕斑形態(tài)更大，為病毒分型提供直觀依據(jù)。
疫苗研發(fā)與生產(chǎn)
減毒疫苗株篩選：因?qū)Σ《镜拿舾行耘c復(fù)制支持能力均衡，可用于篩選安全有效的減毒疫苗株。例如，在 MM-K3 細(xì)胞中連續(xù)傳代乙型腦炎病毒，獲得的減毒株在猴體實(shí)驗(yàn)中神經(jīng)毒力降低 90%，且保留良好的免疫原性（中和抗體效價(jià)達(dá) 1:512），為疫苗開發(fā)提供候選株。
滅活疫苗生產(chǎn)工藝優(yōu)化：在微載體培養(yǎng)系統(tǒng)中，MM-K3 細(xì)胞密度可達(dá) 5×10? cells/cm2，輪狀病毒滴度穩(wěn)定在 10? TCID??/mL，單批次疫苗產(chǎn)量較轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)提升 8 倍，且疫苗抗原純度更高（雜蛋白含量＜0.1%），符合獸用疫苗生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)。
病毒跨物種感染機(jī)制研究
宿主適應(yīng)性突變分析：利用 MM-K3 細(xì)胞模擬獼猴宿主環(huán)境，研究病毒從動(dòng)物向人傳播的分子機(jī)制。例如，通過 SIV 在該細(xì)胞與人類 T 細(xì)胞中的傳代實(shí)驗(yàn)，鑒定出 env 基因的 3 個(gè)氨基酸突變（V3 環(huán)區(qū)域），這些突變使病毒獲得識(shí)別人類 CCR5 的能力，揭示了跨物種傳播的關(guān)鍵突變事件。
抗病毒天然免疫研究：該細(xì)胞系保留完整的固有免疫通路，可用于研究宿主抗病毒天然免疫應(yīng)答。例如，敲除 MM-K3 細(xì)胞的 TLR7 基因后，寨卡病毒復(fù)制效率提升 3 倍，證實(shí) TLR7 介導(dǎo)的 Ⅰ 型干擾素應(yīng)答在抗病毒中的關(guān)鍵作用，為開發(fā)免疫調(diào)節(jié)藥物提供靶點(diǎn)。
基礎(chǔ)培養(yǎng)方案
培養(yǎng)基：MEM 培養(yǎng)基添加 10% 胎牛血清、1% 谷an酰胺，pH 維持在 7.2-7.4，可加入適量抗生素預(yù)防污染（青mei素 - 鏈mei素終濃度 100U/mL）。
傳代流程：當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá) 70%-80% 時(shí)，棄去舊培養(yǎng)基，PBS 洗滌 2 次，加入 0.25% yi酶溶液，37℃孵育 4-5 分鐘至細(xì)胞脫落，加入含血清的培養(yǎng)基終止消化，按 1:4 比例接種至新培養(yǎng)瓶，避免消化過度影響細(xì)胞活性。
凍存保護(hù)：取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞，用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基重懸至密度 8×10?個(gè) /mL，分裝后經(jīng)程序降溫盒 - 80℃過夜，轉(zhuǎn)移至液氮長期保存，復(fù)蘇時(shí) 37℃水浴快速解凍，離心去除 DMSO 后接種，傳代 2 次待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后使用。
病毒培養(yǎng)與檢測
病毒接種：細(xì)胞以 1×10?個(gè) / 孔接種 24 孔板，培養(yǎng) 24 小時(shí)至融合度 60%，用無血清培養(yǎng)基稀釋病毒（MOI=0.1），37℃吸附 1.5 小時(shí)，換含 2% 血清的維持液，每日觀察細(xì)胞病變，72 小時(shí)后通過 TCID??法測定病毒滴度。
病毒鑒定：通過間接免疫熒光檢測病毒抗原（如乙型腦炎病毒 E 蛋白），或提取病毒 RNA 進(jìn)行 RT-PCR 鑒定，確保分離病毒的特異性。
優(yōu)勢：
靈長類模型優(yōu)勢：作為獼猴源細(xì)胞，其生理特性與人類更接近，研究結(jié)果對(duì)人類疾病的參考價(jià)值高于其他動(dòng)物源細(xì)胞，尤其適合人畜共患病研究。
病毒廣譜敏感性：對(duì)多種病毒均有良好支持能力，可減少實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞系的更換，提高研究效率。
培養(yǎng)穩(wěn)定性：生長特性穩(wěn)定，傳代操作簡便，適合標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)流程，批間差異＜10%。
局限性：
倫理與成本限制：獼猴屬于保護(hù)動(dòng)物，細(xì)胞系來源受倫理規(guī)范約束，獲取成本較高，限制了大規(guī)模應(yīng)用。
部分病毒敏感性不足：對(duì)甲型流感病毒等呼吸道病毒的支持能力較弱，滴度較低（＜10? TCID??/mL），需結(jié)合其他細(xì)胞系使用。
物種特異性差異：雖然接近人類，但仍存在物種特異性分子差異（如部分細(xì)胞因子序列），研究結(jié)果需在人源細(xì)胞中驗(yàn)證。
MM-K3 獼猴腎細(xì)胞系的建立為靈長類病毒研究提供了重要工具，其在人畜共患病病毒分離與機(jī)制研究中的應(yīng)用，加深了對(duì)病毒跨物種傳播規(guī)律的理解，為傳染病防控策略制定提供了科學(xué)依據(jù)。在疫苗研發(fā)領(lǐng)域，其高效的病毒支持能力加速了多種獸用疫苗的開發(fā)，降低了動(dòng)物疫病的危害。未來，通過基因編輯技術(shù)引入人源化受體（如 ACE2），可進(jìn)一步提升其對(duì)人類病毒的敏感性；結(jié)合類器官培養(yǎng)技術(shù)，有望構(gòu)建 “腎臟類器官模型"，更真實(shí)模擬病毒在體內(nèi)的感染過程，推動(dòng)病毒學(xué)研究與疫苗開發(fā)的發(fā)展。
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