目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細胞>>細胞系>> BY-1392MA104羅猴胎腎細胞系
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來源與建立背景
形態與生長特征
病毒敏感性與功能特性
受體表達:高表達輪狀病毒受體(如整合素 α2β1、熱休克蛋白 70)和脊髓灰質炎病毒受體(PVR),其中輪狀病毒受體陽性率>95%(流式細胞術檢測),為病毒吸附與入侵提供分子基礎。
病毒復制支持:對輪狀病毒的感染效率達 90% 以上,感染后 48-72 小時出現典型細胞病變(CPE),表現為細胞圓縮、脫落,病毒滴度可達 10?-10? PFU/mL;對脊髓灰質炎病毒 Ⅰ 型的支持能力與 FRhK-4 細胞相當,滴度可達 10? TCID??/mL。
無致瘤性:裸鼠接種實驗顯示無腫瘤形成能力,生物安全性符合疫苗生產的細胞基質要求(WHO 標準)。
輪狀病毒研究與疫苗生產
病毒分離與分型:MA104 是國ji公ren的輪狀病毒分離 “金標準" 細胞系,臨床糞便樣本接種后分離效率達 92%,較 Vero 細胞高 30%,可通過 CPE 出現時間與形態差異區分 A 組(最常見致病型)與非 A 組輪狀病毒。其分離的病毒株經傳代后保持遺傳穩定性,為輪狀病毒基因型別監測提供標準化毒株。
減毒活疫苗生產:因無致瘤性與高病毒產量,廣泛用于輪狀病毒減毒活疫苗的工業化生產。在微載體培養系統中,輪狀病毒滴度可達 5×10? PFU/mL,單批次 1000L 反應器可生產 1000 萬劑疫苗,批間差異<10%,顯著優于原代猴腎細胞工藝。疫苗中宿主細胞 DNA 殘留量<10pg / 劑,符合 WHO 生物制品規范。
其他病毒研究與診斷
脊髓灰質炎病毒檢測:作為脊髓灰質炎病毒分離的備選細胞系,其對 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 型野毒株的檢出率均>90%,支持病毒蝕斑形成實驗,可用于疫苗株與野毒株的鑒別診斷,是*脊髓灰質炎 eradication 計劃(GPEI)的監測工具之一。
腸道病毒快速診斷:對柯薩奇病毒 A 組、埃可病毒等腸道病毒也具有敏感性,可在 48 小時內通過 CPE 判斷病毒存在,為手足口病、無菌性腦膜炎等傳染病的病原學診斷提供快速檢測手段,診斷符合率達 88%。
抗病du藥物篩選與機制研究
藥物活性評估:基于其對輪狀病毒的高敏感性,可構建高通量藥物篩選模型。例如,通過檢測硝唑尼特對輪狀病毒衣殼蛋白 VP4 的抑制效果,測定其 EC??=2.3μM,與動物實驗結果一致性達 0.91,為抗輪狀病du藥物研發提供可靠數據。
病毒入侵機制解析:利用 MA104 研究輪狀病毒與宿主受體的相互作用,已發現整合素 α2β1 的 N 端結構域是病毒吸附的關鍵位點,為靶向受體的抗病du藥物設計提供分子靶點。
基礎培養方案
培養基:MEM 培養基添加 10% 胎牛血清,pH 維持在 7.2-7.4,可加入非必需氨基酸提升細胞活力。
傳代流程:當細胞融合度達 80%-90% 時,棄舊培養基,PBS 洗滌 2 次,加入細胞解離液,37℃孵育 2-3 分鐘至細胞脫落,加入含血清的培養基終止消化,按 1:5 比例接種至新培養瓶,避免過度融合導致病毒敏感性下降。
凍存保護:取對數生長期細胞,用含 10% DMSO 的wan全培養基重懸至密度 8×10?個 /mL,程序降溫后液氮保存,復蘇后傳代 2 次再用于病毒實驗(確保受體表達穩定)。
病毒培養與檢測
輪狀病毒接種:細胞以 2×10?個 / 孔接種 24 孔板,培養 24 小時至融合度 70%,接種前用無血清培養基洗滌 2 次,加入 100μL 系列稀釋的病毒液,37℃吸附 1 小時,換含 2% 血清的維持液,72 小時后觀察 CPE,通過蝕斑法測定病毒滴度。
脊髓灰質炎病毒培養:按 MOI=0.1 接種病毒,吸附后換維持液,48 小時后收集上清,-80℃凍存,通過 RT-PCR 或中和實驗鑒定病毒型別。
優勢:
輪狀病毒敏感性突出:分離效率與病毒產量均居現有細胞系shou位,是輪狀病毒研究的不可替代模型。
生物安全性高:無致瘤性與外源病毒污染風險,符合疫苗生產的嚴格標準。
操作簡便:貼壁生長穩定,傳代與凍存流程成熟,適合標準化實驗室操作。
局限性:
病毒譜較窄:對呼吸道病毒、包膜病毒敏感性低,應用范圍受限。
血清依賴度高:無血清培養基中細胞生長緩慢,病毒產量下降約 40%,增加工業化生產成本。
傳代限制:傳代>100 次后輪狀病毒受體表達下降,需定期復蘇早期凍存細胞。
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