目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細胞>>細胞系>> BY-1373COS-1 SV40轉化的非洲綠猴腎細胞系
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來源與轉化機制：該細胞系源自 1964 年分離的非洲綠猴腎原代細胞，通過轉染 SV40 病毒早期區域基因獲得永生化克隆。轉化過程中，SV40 大 T 抗原基因整合入宿主基因組并穩定表達，該抗原可與 p53、Rb 等抑癌蛋白結合并使其失活，同時激活細胞周期調控通路，實現永生化。全基因組測序顯示其染色體數目為 60（近二倍體），與原代腎上皮細胞遺傳相似度＞95%，SV40 大 T 抗原表達陽性率達 100%（免疫熒光檢測）。
形態與增殖：體外培養呈典型上皮樣形態，貼壁生長時呈多邊形，胞核大而圓，細胞排列緊密呈單層；懸浮培養易脫落死亡，故以貼壁培養為主。37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 18-22 小時，適應含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養基，傳代 50 次內生長速率穩定（衰減＜10%），凍存復蘇后存活率超 85%，群體倍增時間較原代腎細胞縮短 40%。
功能特征：核心優勢在于 SV40 大 T 抗原介導的高效復制能力：該抗原可與含 SV40 復制起點（ori）的質粒結合，啟動滾環復制，使外源基因拷貝數在轉染后 48 小時內擴增至 10?-10? copies/cell，瞬時表達效率較 HEK293 細胞高 2-3 倍。同時，其具備完整的蛋白加工系統，分泌型重組蛋白的糖基化修飾正確率達 90% 以上，且無內源性病毒污染（經 WHO 認證的無支原體、病毒檢測報告）。
病毒學研究與疫苗開發
重組蛋白瞬時表達
基因功能與信號通路研究
貼壁培養操作：
復蘇：凍存管 37℃水浴 1 分鐘解凍，轉移至含 10mL 預熱培養基（DMEM+10% 胎牛血清）的離心管，1000rpm 離心 5 分鐘，重懸后接種至 T75 瓶，37℃、5% CO?培養，24 小時貼壁率超 90%。
換液：接種 24 小時后首ci換液，去除未貼壁細胞，此后每 2 天換液一次，維持細胞密度在 5×10?-2×10?個 /cm2（密度過高易引發接觸抑制）。
傳代：融合度達 70%-80% 時，棄培養基，PBS 清洗 2 次，加 2mL 細胞解離液，37℃孵育 1-2 分鐘，鏡檢細胞脫落后加 8mL 培養基終止，按 1:4 比例傳代，避免過度融合導致大 T 抗原表達下調。
瞬時轉染流程：
細胞準備：轉染前 24 小時，以 5×10?個 / 孔接種 6 孔板，使轉染時融合度達 60%-70%。
轉染復合物制備：將 2μg 含 SV40 ori 的質粒與 5μL 脂質體試劑分別溶于無血清 DMEM，混合后室溫孵育 20 分鐘。
表達檢測：轉染后 4-6 小時換液，48-72 小時通過 Western blot 或熒光檢測蛋白表達，最佳收獲時間點較 HEK293 提前 12 小時。
凍存流程：取對數生長期細胞，1000rpm 離心 5 分鐘，凍存液（70% DMEM+20% 胎牛血清 + 10% DMSO）重懸至 5×10?個 /mL，分裝凍存管，程序降溫盒 - 80℃過夜后移至液氮，保存期超 5 年，復蘇后需傳代 1 次再用于轉染實驗（確保大 T 抗原表達恢復）。
優勢：瞬時轉染效率高（＞80%），外源基因拷貝數擴增能力強；蛋白表達周期短（48-72 小時），適合快速實驗驗證；無內源性病毒污染，生物安全性高；對多種表達載體兼容性好，無需特殊篩選標記。
局限性：長期傳代（＞60 次）易出現大 T 抗原表達下調（約 20%）；懸浮培養能力差，難以規模化生產；部分復雜膜蛋白的表達量較低（＜1mg/L）；存在成瘤性（裸鼠接種可形成腫瘤），操作需符合生物安全二級標準。
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