NRK-52E大鼠腎上皮細胞系
NRK-52E大鼠腎上皮細胞系作為源自大鼠腎臟近曲小管的上皮細胞模型,因保留腎臟近曲小管的重吸收功能及代謝特性,在腎臟損傷修復機制、腎小管功能調控及腎臟疾病病理研究中具有重要價值,成為探究腎臟近曲小管生理功能及相關疾病的關鍵實驗工具。
細胞特性與來源背景:該細胞系源自大鼠腎臟近曲小管組織,經原代培養和純化獲得。細胞形態呈上皮樣,多為立方形或多邊形,胞體大小均勻(直徑約 16-20μm),胞質豐富且呈嗜酸性,可見較多的線粒體和內質網,細胞核呈圓形,位于細胞中央,核仁清晰。生長方式為貼壁生長,呈單層鋪路石樣排列,具有明顯的接觸抑制現象,傳代后 24 小時貼壁率達 93%。核心參數表現出正常腎上皮細胞特征:倍增時間約 58 小時,連續傳代 20 次后仍保持穩定的生物學特性;表面標志物表達du特,細胞角蛋白 18(CK18)陽性率達 96%,近曲小管標志物 γ- 谷氨酰轉肽酶(GGT)陽性率 94%,上皮細胞黏附分子(EpCAM)陽性率 92%;具有正常的二倍體核型(染色體數 42 條),無染色體畸變;能主動吸收葡萄糖和氨基酸,葡萄糖轉運速率達 30nmol/(h?mg 蛋白),氨的生成量達 25μmol/(h?10?細胞);可分泌腎素,基礎分泌量達 18ng/mL,在血管緊張素 Ⅱ 刺激下分泌量增加 2.3 倍;無微生物污染,細胞純度達 97%,保障實驗結果的可靠性。
科研應用價值:在腎臟損傷修復研究中,NRK-52E 細胞經過氧化氫(H?O?)處理 24 小時后,凋亡率增加 40%,炎癥因子 IL-1β 分泌量提升 4.5 倍,細胞遷移速率下降 35%;經表皮生長因子(EGF)處理后,增殖活性提升 50%,遷移速率增加 60%,可模擬腎臟氧化損傷及修復過程,為解析腎臟損傷修復機制提供理想模型。
在腎小管功能調控研究方面,該細胞經醛固酮處理 48 小時后,鈉鉀 ATP 酶活性增強 3.2 倍,鈉離子重吸收量增加 45%,水通道蛋白 1(AQP1)表達量提升 40%,可模擬醛固酮對腎小管重吸收功能的調控過程,適用于探究腎小管水鈉代謝調節機制。
腎臟疾病研究領域,該細胞經高糖(30mM)處理后,細胞外基質蛋白 Ⅰ 型膠原蛋白分泌量增加 2.8 倍,轉化生長因子 -β1(TGF-β1)表達量提升 55%,細胞出現纖維化樣改變,能很好地模擬糖尿病腎病中腎小管的病變過程,為探究糖尿病腎病的發病機制提供實驗基礎。此外,該細胞與腎間質成纖維細胞共培養時,成纖維細胞的 α- 平滑肌肌動蛋白表達量增加 3 倍,可用于探究腎小管 - 間質相互作用在腎纖維化中的調控機制。
培養與保存規范:推薦使用含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養基,添加 2mM 谷an酰胺、1% 非必需氨基酸及 1% 抗生素混合液,培養環境為 37℃、5% CO?飽和濕度培養箱。培養基需每 2 天更換一次,以維持細胞的正常代謝功能。傳代時,用 PBS 沖洗細胞 2 次,加入專用細胞解離液,37℃孵育 8-10 分鐘,待細胞間隙增大后輕輕吹打使細胞脫落,傳代比例為 1:3-1:4,每 4-5 天傳代一次,避免過度傳代導致功能異常。
凍存液采用培養基 + 10% DMSO+20% 胎牛血清的混合液,細胞濃度調整為 4×10?個 /ml,經程序降溫(-20℃1 小時→-80℃過夜→液氮保存)后,復蘇存活率達 86% 以上,2-3 代內可恢復正常的生長和功能。運輸采用干冰冷凍運輸或培養瓶活細胞運輸,收到細胞后需靜置培養 24 小時,更換培養基后觀察細胞形態,確認無異常漂浮物且排列整齊后進行實驗。該細胞系僅限科研使用,操作時需避免頻繁更換培養條件,以防影響其代謝功能。
NRK-52E 大鼠腎上皮細胞系以其穩定的近曲小管特性、完整的重吸收功能及典型的腎臟代謝活性,在腎臟生物學研究與腎臟疾病機制探索中發揮著重要作用,為揭示腎臟疾病的發病機制和開發新型治療藥物提供了可靠的細胞模型。
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