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VERO C1008 (E6)非洲綠猴腎細胞系
VERO C1008 (E6)非洲綠猴腎細胞系，VERO C1008 (E6) 是 Vero 細胞家族的高分化亞系，源自非洲綠猴腎上皮細胞，因穩定高表達 ACE2 受體、對冠狀病毒（如 SARS-CoV-2、SARS-CoV）敏感性突出，且能支持病毒高效復制，成為冠狀病毒研究、疫苗生產及抗病du藥物篩選的核心模型。其保留 Vero 細胞的遺傳穩定性與培養優勢，同時因受體特異性高表達，為冠狀病毒入侵機制研究提供了精準靶向的實驗平臺。
來源與亞系特征：該細胞系源自 Vero 親本細胞，通過克隆篩選獲得第 1008 代單克隆亞系（“C1008" 代表克隆傳代編號，“E6" 為功能亞型標記）。篩選過程以 ACE2 受體表達量與冠狀病毒敏感性為核心指標，未引入外源基因，全基因組測序顯示其染色體數目為 60（近二倍體），與 Vero 親本遺傳相似度＞99%，核型穩定性在傳代 150 次內畸變率＜2%，群體均一性（流式檢測 ACE2 陽性率＞98%）優于普通 Vero 細胞。
形態與增殖：體外培養呈典型上皮樣形態，貼壁生長時呈多角形，胞質均勻，細胞排列緊密呈單層；懸浮培養可形成小聚集體（直徑 20-40μm），但以貼壁培養為主。37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 26-30 小時，適應含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養基，傳代 100 次以上生長速率衰減＜10%，凍存復蘇后存活率超 90%，無血清馴化后細胞密度可達 4.5×10?個 /cm2。
功能特征：核心優勢在于 ACE2 受體高表達與病毒親和性：ACE2 蛋白表達量較 Vero E6 細胞高 1.8 倍（Western blot 定量），與 SARS-CoV-2 刺突蛋白的結合親和力（KD=1.2nM）顯著高于其他猴腎細胞系。感染 SARS-CoV-2 后 48 小時，病毒滴度可達 10?-10? TCID??/mL，較普通 Vero 細胞高 2 個數量級；細胞病變（CPE）表現為細胞融合、脫落，60 小時病變率達 95%，且能支持病毒連續傳代 10 次以上（滴度衰減＜30%）。
冠狀病毒分離與機制研究
冠狀病毒疫苗研發與生產
抗病du藥物篩選與評價
貼壁培養操作：
復蘇：凍存管 37℃水浴 1 分鐘解凍，轉移至含 10mL 預熱培養基（DMEM/F12+10% 胎牛血清）的離心管，1000rpm 離心 5 分鐘，重懸后接種至 T75 瓶，37℃、5% CO?培養，24 小時貼壁率超 95%。
換液：接種 48 小時后shou次換液，去除代謝廢物，此后每 2-3 天換液一次，維持細胞密度在 3×10?-1×10?個 /cm2（密度過高會降低 ACE2 表達）。
傳代：融合度達 80% 時，棄培養基，PBS 清洗 2 次，加 2mL 細胞解離液，37℃孵育 2 分鐘，鏡檢細胞脫落后加 8mL 培養基終止，按 1:5 比例傳代，每 20 代通過流式檢測 ACE2 表達（陽性率需＞95%）。
病毒培養流程：
接種準備：將細胞以 1.5×10?個 / 孔接種 24 孔板，培養 24 小時至融合度 70%-80%，接種前用無血清培養基洗滌 2 次。
病毒感染：加入 100μL 系列稀釋的冠狀病毒液（如 SARS-CoV-2），37℃吸附 1 小時，期間每 15 分鐘輕搖一次，吸棄病毒液后加含 2% 血清的維持液。
觀察與收獲：感染后 48-60 小時觀察 CPE，待 80% 細胞病變時收獲上清，-80℃凍存，通過 TCID??法或 RT-PCR 測定病毒滴度。
凍存流程：取對數生長期細胞，1000rpm 離心 5 分鐘，凍存液（70% DMEM/F12+20% 胎牛血清 + 10% DMSO）重懸至 8×10?個 /mL，分裝凍存管，程序降溫盒 - 80℃過夜后移至液氮，保存期超 6 年，復蘇后傳代 1 次即可用于實驗（ACE2 表達穩定）。
優勢：ACE2 受體高表達且穩定（傳代 100 次陽性率＞95%），對冠狀病毒敏感性ji高（滴度較普通 Vero 高 100 倍）；遺傳背景清晰，實驗重復性好（CV＜6%）；符合 GMP 標準，無內源性病毒污染；可適應無血清與大規模培養，便于工業化生產；病毒復制周期短，CPE 特征典型。
局限性：對副黏病毒、腸道病毒敏感性較低；長期傳代（＞150 次）可能出現 ACE2 表達下調（約 12%）；貼壁依賴性較強，懸浮培養聚集體易增大（＞100μm）；缺乏干擾素系統，可能影響藥物體內外活性關聯分析。
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