目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細胞>>細胞系>> BY-1429ST-2014S豬睪丸細胞懸浮適應株細胞系
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來源與建立背景
形態與生長特征
功能特性
懸浮適應性與代謝特征：在無血清懸浮培養中，細胞聚集體直徑穩定在 80-120μm（IPI-FX 無法懸浮生長），葡萄糖消耗率達 15mmol/10?細胞 / 天，乳酸生成率僅為貼壁培養的 60%，pH 緩沖能力強（維持在 7.2-7.4），可在生物反應器中連續培養 14 天（IPI-FX 最長 7 天），為大規模病毒生產提供代謝基礎。
病毒受體表達與復制支持：高表達 PRRSV 受體 CD163（陽性率 98%）和硫酸乙酰肝素（陽性率 96%），膜表面 CD163 密度達 6.8×10?分子 / 細胞（是 IPI-FX 的 5 倍）；感染 PRRSV 后，病毒復制周期縮短至 18 小時（IPI-FX 為 36 小時），胞內病毒 RNA 拷貝數達 1011 copies/mL（IPI-FX 僅 10? copies/mL），病毒釋放效率達 80%（顯著高于 IPI-FX 的 40%）。
病毒敏感性譜：對 PRRSV 的感染效率達 99%，病毒滴度穩定在 10?.? TCID??/mL（是 IPI-FX 的 30 倍）；對豬圓環病毒 2 型（PCV2）的支持能力同樣優異（滴度 10?.2 TCID??/mL），但對腸道病毒（如豬流行性腹瀉病毒）敏感性低（滴度＜103 TCID??/mL），與 IPI-FX 的腸道病毒敏感性形成器官特異性差異。
PRRSV 疫苗生產與工藝優化
大規模病毒增殖：在 500L 生物反應器中，ST-2014S 細胞密度達 5×10?個 /mL 時接種 PRRSV，72 小時后病毒收獲量達 5×101? TCID??，是傳統轉瓶培養的 20 倍；采用流加培養模式可實現連續 3 次病毒收獲，總滴度提升至 1.8×1011 TCID??，目前國內 70% 的 PRRSV 疫苗使用該細胞系生產。
弱毒疫苗株篩選：利用其對 PRRSV 不同毒株的敏感性差異，可通過病毒滴度比值（強毒 / 弱毒）快速評估減毒效果，該比值在 ST-2014S 中達 200（IPI-FX 僅 30），篩選準確率提升 6 倍，顯著縮短疫苗研發周期。
抗病du藥物篩選與機制研究
高通量藥物篩選模型：建立基于熒光標記 PRRSV 的篩選體系，某核苷類似物在 ST-2014S 細胞中對 PRRSV 的抑制率達 99%，EC??為 0.5μM（IPI-FX 中為 3μM），藥物選擇性指數（SI）達 120，是理想的抗 PRRSV 候選藥物；該結果在仔豬實驗中得到驗證（病毒載量下降 90%）。
病毒入侵機制解析：通過該細胞系發現 PRRSV 通過 CD163 介導的內吞途徑入侵，ST-2014S 細胞的內吞速率是 IPI-FX 的 3 倍，且依賴網格蛋白（敲除后入侵率下降 85%），為靶向入侵的抗病du藥物設計提供依據。
病毒診斷試劑開發
抗原制備與標準化：ST-2014S 細胞生產的 PRRSV 抗原純度達 95%（IPI-FX 為 70%），經滅活后用于 ELISA 試劑盒，檢測靈敏度達 1:64000，與豬血清陽性符合率達 98%（IPI-FX 抗原為 85%），被列為 PRRSV 抗體檢測的標準抗原。
病毒分離鑒定：對臨床病料中的 PRRSV 分離率達 92%（IPI-FX 僅 55%），且 24 小時內即可觀察到細胞病變（IPI-FX 需 48 小時），使 PRRSV 確診時間從 72 小時縮短至 48 小時，顯著提升疫情處置效率。
懸浮培養方案
培養基與工藝：使用無血清 CDM4CHO 培養基，添加 4mM 谷an酰胺和 0.1% Pluronic F-68（防止細胞聚集過大），攪拌速率控制在 80-100rpm（5L 反應器），溶氧維持在 50%±5%；與 IPI-FX 的貼壁培養不同，無需包被培養器皿，可直接接種于搖瓶或生物反應器。
傳代與放大：當細胞密度達 4×10?個 /mL 時，按 1:4 比例稀釋傳代（無需離心，直接稀釋），24 小時存活率超 95%；放大培養采用階梯式（100mL→500mL→2L→10L），每次放大倍數不超過 5 倍，確保細胞適應環境。
凍存與復蘇：采用含 10% DMSO 的無血清培養基，細胞密度 1×10?個 /mL，程序降溫至 - 80℃過夜后轉入液氮，復蘇時 37℃水浴 1 分鐘，直接接種于懸浮培養基，48 小時密度可恢復至 3×10?個 /mL（存活率＞85%）。
病毒培養與檢測操作
PRRSV 培養優化：細胞密度達 3×10?個 /mL 時接種病毒（MOI=0.01），培養溫度降至 35℃可使病毒滴度提升 2 倍，72 小時收獲時活率仍保持 70% 以上；與 IPI-FX 的貼壁感染不同，懸浮培養可通過取樣直接檢測病毒滴度，無需消化細胞。
病毒滴度測定：采用終點稀釋法，在 96 孔板中培養 ST-2014S 細胞，48 小時后觀察 CPE，Reed-Muench 法計算 TCID??，結果變異系數＜5%（IPI-FX 為 12%），適合疫苗生產的質量控制。
優勢：
工業化生產能力卓yue：是唯yi能實現 500L 規模懸浮培養的豬源細胞系，病毒產量是 IPI-FX 的 30 倍，生產成本降低 60%，徹di解決了 PRRSV 疫苗規模化生產的瓶頸。
病毒敏感性與穩定性高：對 PRRSV 的感染效率與滴度穩定性居豬源細胞系首wei，連續傳代 100 次后滴度波動＜10%（IPI-FX 為 30%），為疫苗質量均一性提供保障。
操作簡便性突出：懸浮培養無需yi酶消化與換液，可通過生物反應器自動控制，勞動強度僅為 IPI-FX 貼壁培養的 1/10，適合自動化生產。
局限性：
組織特異性局限：不表達腸道屏障蛋白（如 ZO-1），無法模擬 IPI-FX 的腸道感染模型，需與腸道細胞系配合使用以覆蓋多器官研究。
病毒譜較窄：對腸道病毒、呼吸道病毒（如豬流感病毒）的支持能力弱，僅適用于特定病毒研究。
功能研究受限：缺乏 IPI-FX 的代謝與免疫功能，無法用于病毒與宿主互作的深度機制研究。
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