目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細(xì)胞>>細(xì)胞系>> BY-1432hTERT-PBEC豬支氣管上皮細(xì)胞系
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來源與建立背景
形態(tài)與生長特征
功能特性
氣道上皮標(biāo)志物與分化功能：高表達(dá)氣道特異性標(biāo)志物，如細(xì)胞角蛋白 18（CK18，陽性率 97%）、黏液蛋白 5AC（MUC5AC，陽性率 95%），其 MUC5AC 分泌量達(dá) 20μg/10?細(xì)胞 / 天（2G9 幾乎不表達(dá)）；纖毛擺動頻率達(dá) 12 次 / 秒，能有效清除異物顆粒（清除率達(dá) 65%，2G9 無此功能），模擬氣道黏膜的物理防御機(jī)制，與豬支氣管組織的功能一致性達(dá) 92%。
屏障功能與免疫活性：跨上皮電阻（TEER）值達(dá) 550Ω?cm2（顯著高于 2G9 的 200Ω?cm2），緊密連接蛋白 occludin 和 claudin-1 表達(dá)豐富；感染病毒后可快速分泌 Ⅰ 型干擾素（IFN-α 達(dá) 80pg/mL，是 2G9 的 3 倍），TLR3/7 表達(dá)量是 2G9 的 5 倍，先天免疫應(yīng)答能力顯著更強(qiáng)，更接近在體氣道的免疫防御狀態(tài)。
病毒敏感性譜：對呼吸道病毒（如 PRRSV、SIV）的感染效率達(dá) 96%，感染后 72 小時出現(xiàn)典型細(xì)胞病變（纖毛脫落、細(xì)胞融合），PRRSV 滴度達(dá) 10?.? TCID??/mL（是 2G9 的 80 倍）；因高表達(dá)唾液酸受體（SAα2,6）和 CD163 分子，對氣道靶向病毒的吸附效率顯著高于腎細(xì)胞系，尤其適合呼吸道病毒感染機(jī)制研究。
氣道疾病機(jī)制研究
哮喘模型構(gòu)建：通過該細(xì)胞系發(fā)現(xiàn)塵螨過敏原可誘導(dǎo) MUC5AC 表達(dá)增加 3 倍，IL-8 分泌量上升 4 倍，與哮喘仔豬支氣管黏液高分泌特征一致性達(dá) 93%（2G9 模型無法模擬），揭示 “過敏原 - 黏液過度分泌" 的疾病軸。
慢性阻塞性肺疾病（COPD）研究：在香煙煙霧提取物處理后，細(xì)胞抗氧化酶活性下降 50%，炎癥因子 TNF-α 表達(dá)提升 2.5 倍，纖毛擺動頻率降至 5 次 / 秒，模擬 COPD 的氣道損傷過程，其病理指標(biāo)與臨床病例吻合度達(dá) 89%。
呼吸道病毒感染研究
PRRSV 氣道入侵機(jī)制：利用其氣道上皮特性，發(fā)現(xiàn)病毒可通過破壞緊密連接蛋白（claudin-1 降解增加 40%）突破屏障，同時誘導(dǎo)上皮 - 間質(zhì)轉(zhuǎn)化（α-SMA 表達(dá)上升 3 倍），與 PRRSV 感染仔豬的支氣管纖維化程度正相關(guān)（R2=0.91），研究結(jié)果較 2G9 模型更接近在體感染特征。
抗病毒天然免疫研究：在 SIV 感染后，細(xì)胞 RIG-I 樣受體（RLR）通路激活，IFN-β 表達(dá)量 6 小時達(dá)峰值（120pg/mL），敲除 RIG-I 后病毒滴度提升 100 倍，證實天然免疫對流感病毒的抑制作用，其信號通路激活模式與豬支氣管組織的吻合度達(dá) 90%。
吸入制劑研發(fā)與評價
藥物遞送效率檢測：建立基于氣道屏障的藥物吸收模型，某霧化疫苗經(jīng)該細(xì)胞系轉(zhuǎn)運效率達(dá) 45%（2G9 模型僅 15%），與仔豬吸入免疫后的黏膜抗體水平相關(guān)性達(dá) 92%，被獸藥企業(yè)列為吸入制劑的shou選評價模型。
氣道毒性篩選：某抗生素霧化劑在該模型中顯示黏膜損傷（TEER 值下降 60%），與仔豬氣道黏膜糜爛的病理結(jié)果一致性達(dá) 88%（2G9 模型無此反應(yīng)），可精準(zhǔn)預(yù)測吸入藥物的局部毒性。
基礎(chǔ)培養(yǎng)方案
培養(yǎng)基：BEGM 培養(yǎng)基添加 bovine pituitary extract（BPE）和表皮生長因子（EGF），pH 維持在 7.2-7.4；誘導(dǎo)分化需去除 EGF 并添加 1μM 視huang酸，培養(yǎng) 14 天后纖毛細(xì)胞比例可達(dá) 40%（2G9 無需此步驟）。
傳代流程：當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá) 70% 時，按 1:2 比例接種（低于 2G9 的 1:6 比例），使用 0.05% yi酶 + EDTA 消化，離心速度 1000rpm，24 小時貼壁率超 90%，避免過度融合（＞80% 會導(dǎo)致纖毛分化受阻）。
凍存保護(hù)：采用含 10% DMSO 的 BEGM 培養(yǎng)基，細(xì)胞密度 2×10?個 /mL，程序降溫至 - 80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮，復(fù)蘇時 37℃水浴 1 分鐘，接種后 72 小時更換培養(yǎng)基，存活率可達(dá) 85%，需檢測 MUC5AC 表達(dá)確認(rèn)功能穩(wěn)定。
功能實驗操作
病毒感染優(yōu)化：細(xì)胞接種 Transwell 小室（孔徑 0.4μm），培養(yǎng) 14 天形成分化單層后， apical 側(cè)接種 PRRSV（MOI=0.1），37℃培養(yǎng) 72 小時，basolateral 側(cè)病毒滴度可達(dá) 10?.? TCID??/mL，結(jié)果變異系數(shù)＜6%（2G9 為 12%）。
纖毛功能檢測：使用高速攝像系統(tǒng)記錄纖毛擺動頻率，經(jīng) 10ng/mL TNF-α 處理后頻率下降 40%，可用于抗炎藥物篩選。
優(yōu)勢：
氣道功能完整性：是唯yi能模擬支氣管上皮分化功能的永生化細(xì)胞系，黏液分泌與纖毛擺動功能顯著優(yōu)于 2G9 等腎細(xì)胞系，為氣道疾病研究提供專屬模型。
病毒敏感性靶向性：對呼吸道病毒的感染效率與復(fù)制支持能力居豬源細(xì)胞系首wei，PRRSV 滴度是 2G9 的 80 倍，大幅提升呼吸道病毒研究的準(zhǔn)確性。
藥物評價相關(guān)性強(qiáng)：與豬氣道在體狀態(tài)的生理功能一致性達(dá) 92%，吸入制劑的遞送效率與毒性評價結(jié)果臨床參考價值高，較 2G9 模型預(yù)測準(zhǔn)確率提升 60%。
局限性：
培養(yǎng)成本高：專用培養(yǎng)基價格是 2G9 所用 MEM 的 5 倍，且分化誘導(dǎo)需 14 天，實驗周期長（2G9 僅需 3 天）。
病毒譜局限：對豬瘟病毒等腎嗜性病毒的敏感性僅為 2G9 的 5%，需與腎細(xì)胞系配合使用以覆蓋全身病毒研究。
增殖能力弱：倍增時間長，大規(guī)模培養(yǎng)難度高于 2G9，不適合疫苗工業(yè)化生產(chǎn)。
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