目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細胞>>細胞系>> BY-1368CHO-K1中國倉鼠卵巢細胞系
供貨周期 | 現貨 |
---|
來源與馴化:該細胞系源自 1957 年分離的中國倉鼠卵巢組織,經克隆篩選獲得第 1 株穩定傳代的亞系(“K1" 代表克隆編號)。原代細胞通過yi酶消化法分離,經 60 代連續傳代后形成永生化株系,未引入外源基因,全基因組測序顯示其染色體數目為 2n=20-22(存在天然異倍性),與原代卵巢細胞遺傳相似度>96%,核型穩定性在傳代 100 次內畸變率<3%。
形態與增殖:體外培養呈典型上皮樣形態,貼壁生長時呈多角形,胞質豐富且邊界清晰,排列緊密呈鋪路石狀;懸浮培養可形成松散聚集體(直徑 20-50μm),適應無血清懸浮馴化。37℃、5% CO?條件下,增殖周期約 18-22 小時,較其他 CHO 亞系更短,適應含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養基,傳代 200 次以上生長速率衰減<15%,凍存復蘇后存活率超 90%。
功能特征:核心優勢在于全能性蛋白表達與修飾系統:具備完整的糖基化、磷酸化等翻譯后修飾 machinery,重組蛋白產物與天然蛋白結構一致性達 95% 以上;無 DHFR(二氫ye酸還原酶)等代謝缺陷,可直接在基礎培養基中生長,外源基因整合效率較 CHO-S 高 20%。同時,其對基因編輯工具(如 CRISPR/Cas9)響應靈敏,突變效率可達 35%-50%,便于構建工程細胞株。
重組蛋白規模化生產
生物藥研發與工藝優化
基因編輯與功能研究
貼壁培養操作:
復蘇:凍存管 37℃水浴 1 分鐘解凍,轉移至含 10mL 預熱培養基(DMEM/F12+10% 胎牛血清)的離心管,1000rpm 離心 5 分鐘,重懸后接種至 T75 瓶,37℃、5% CO?培養,24 小時貼壁率超 95%。
換液:接種 48 小時后首ci換液,去除代謝廢物,此后每 2-3 天換液一次,維持細胞密度在 2×10?-1×10?個 /cm2。
傳代:融合度達 80% 時,棄培養基,PBS 清洗 2 次,加 2mL 細胞解離液,37℃孵育 1-2 分鐘,鏡檢細胞脫落后加 8mL 培養基終止,按 1:6 比例傳代,避免過度融合導致形態改變。
懸浮馴化流程:
起始:取 80% 融合度的貼壁細胞,用無血清培養基重懸至 2×10?個 /mL,接種至 125mL 搖瓶(工作體積 30mL),120rpm 振蕩培養。
適應:每 3 天傳代一次,逐步提高轉速(每周增加 10rpm 至 140rpm),血清濃度每周降低 2%,6-8 周后實現無血清懸浮培養。
維持:懸浮細胞密度達 3-5×10?個 /mL 時傳代,按 1:4 比例稀釋,補加葡萄糖(終濃度 3-5g/L)維持代謝需求。
凍存流程:取對數生長期細胞,1000rpm 離心 5 分鐘,凍存液(70% 培養基 + 20% 胎牛血清 + 10% DMSO)重懸至 1×10?個 /mL,分裝凍存管,程序降溫盒 - 80℃過夜后移至液氮,保存期超 7 年,復蘇后傳代 1 次即可用于實驗。
優勢:遺傳背景清晰,無天然代謝缺陷;蛋白表達量高(5-8g/L)且翻譯后修飾接近人源;適應貼壁與懸浮培養,可規?;糯?;基因編輯效率高,便于工程改造;傳代穩定性優異,200 代內特性無顯著改變。
局限性:部分復雜糖蛋白(如含多天線高甘露糖型)表達效率低;懸浮培養時易形成大聚集體(>100μm),影響傳質效率;長期傳代可能積累隨機突變(>200 代),需定期純化克隆。
以上信息僅供參考,詳細信息請聯系我們。